内容发布更新时间 : 2024/11/19 21:22:48星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

B.40皮肤腐蚀

1.方法

1.1.引言

对皮肤腐蚀性的两个体外测定，鼠皮穿刺的电学反抗（TER）分析和利用人皮模型的测定，已被欧洲选择方法确认中心在技术上认可（ECVAM,联合研究中心，欧洲委员会）（1）（2）（3）。ECVAM的研究变动性证明两个测定都能合理的区别皮肤的腐蚀和不腐蚀，进而，基于人皮模型的测定草案能区别腐蚀影响的程度（已知的严重的皮肤腐蚀，R35，和其它皮肤腐蚀，R34）（2）。也给出了两个测定的描述和步骤选择，利用哪个测定取决于特定大要求和使用者的喜好。 又见B部分的总引言。 1.2 定义

皮肤腐蚀性：随测定物质的适用性而产生的皮肤不能变更的组织损害。 1.3 参考物质

没有特定的，可见1.5.3.4和1.7.2.3 。 1.4 鼠皮三次测定测定方法原则

测定物质应放在用人为方法杀死的年轻老鼠的毛皮上获得的原形表

皮上超过24小时。腐蚀材料应通过它们能产生损失正常完整性和界限功能的能力来证明，这种能力是以在开始水平（5k）下的固有的TER来测量的（4）（5）。有刺激和无刺激的材料不能减少在开始水平以下的TER。染色步骤可以与表面活性剂和酸碱平衡的器官（定义见参考文献（6））的测定步骤合并进行，以减少用这些化学方式（2）（7）得到的错误的阳性结果的数目。 1.5.鼠皮三次测定测定方法的描述 1.5.1动物

为准备圆形表皮需要的年轻的（20-23天）的老鼠（Wistar或一种可比较的种类）。表面或侧腹的毛用小的动物剪毛机小心的移去，之后仔细清洗动物，浸入溶有抗生素的区域（包含，例如，集中影响细菌生长的链霉素,青霉素,氯霉素和两性霉素）。在第一次洗后应在第三第四天后用抗生素再洗一次，在三天内使用（对于毛皮准备的动物不能大于31天）。

1.5.2 圆形表皮的准备

人为杀死动物。移去每只动物样品的背面皮肤，剥去皮肤上多余的脂肪。毛皮放在聚四氟乙烯试管的末端，保证表皮与试管接触。用圆形橡胶圈按住在试管的末端，保持皮肤的位置并将多余的组织除去。在图1中显示了试管和橡胶圈的尺寸。随后用石油胶状物仔细密封在试管的末端。试管用一个在硫酸镁溶液感受器中的弹簧夹支持

（154mM）(图2)。 1.5.3 测定步骤

1.5.3.1 测定材料的适用性

液体测定物质（150μL）应用于试管内的表皮（图2）。测固体物质时，利用充足量的固体保证整个表皮都被覆盖。在固体顶部加去离子水（150μL），慢慢晃动试管。测定物质应最大程度的接触皮肤。对于一些固体可以加热到30C溶解测定物质来得到,或碾磨成颗粒状或粉末状。

每个测定物质需三种皮肤，且要求24小时（又见1。5。3。4）。测定物质利用高于30C的自来水的喷射来除去直到没有更多的物质可除

0去。已在试管中固化的物质的除去应利用大于30C左右的温水喷射

00来除去。 1.5.3.2 TER测定

TER通过利用低压交流电桥来测量（例如AIM401或6401或相当物）。测电阻前，皮肤的表面菌种可通过加在表皮上的充足量的70%乙醇来减轻，几秒钟后通过到转试管来除去乙醇，随后用3mL硫酸镁（154mM）水合化组织。电桥电极放在皮肤的任一边来进行k?档皮肤电阻的测量（图2）。电阻的大小和电极的长度在鳄鱼皮的接触下，见图1。在电阻测量期间内部（重的）电极夹停在聚四氟乙烯试管的顶部，保证浸入硫酸镁溶液的电极不变。外部（轻的）电极放在感受器内部即在感受器的内的底部。弹簧夹底部到PTFE试管底部的距离