内容发布更新时间 : 2024/11/15 2:06:19星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

磁珠法粪便基因组DNA提取试剂盒（加强版）

MagBeads Faeces DNA Extraction Kit (Advanced Version)

【目 录 号】FDE-5005、FDE-5030 【运输条件】2~25℃；

【保存条件】磁珠悬浮液、裂解液2 2~8℃，蛋白酶K-20℃，其它组分室温； 【试剂盒组成】

Kit Component 试剂盒组成 FDE Magnetic Beads 磁珠悬浮液 FDE Buffer 1 裂解液1 FDE Buffer 2 裂解液2 Decolor Buffer 脱色缓冲液 Wash Buffer 清洗液 Elute Buffer 洗脱液 FDE-5005 （50T） 5mL 50mL 12.5mL 1mL 30mL 5mL FDE-5030 （300T） 25mL 300mL 75mL 3mL 180mL 30mL 【注意事项】

1. 磁珠悬浮液严禁反复冻融和离心，以免磁珠受到损害，使用前务必充分混匀；

2. 使用前请检查裂解液1/2/3中是否出现结晶，如有结晶请将置于于37℃环境中重新溶解； 3. 本操作指南经本公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南建议操作。

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磁珠法·自动化：为生命科学提供自动化磁纳米捕获方案

【产品简介】

本试剂盒适用于从各种固态或液态粪便样本中分离纯化基因组DNA，尤其针对使用常规方法提取粪便样本所得DNA产物颜色较重的样本。试剂盒采用具有独特分离作用的纳米磁珠和缓冲液体系，特殊技术包埋的磁珠在特定条件下对核酸具有极强的富集能力，当条件改变时，磁珠会释放所吸附的核酸，从而达到快速分离纯化核酸的目的。方法简便、快捷、质量稳定。提取所得基因组DNA产物，纯度优良，可应用于酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等各种下游分子生物学实验。本试剂盒可手动法在EP管中进行操作，亦可配合核酸提取仪实现自动化操作。 【试剂盒说明】

样本类型 固态粪便 液态粪便 【自备试剂】

“酚/氯仿/异戊醇”试剂、异丙醇、80%乙醇、RNase A溶液(100mg/mL，分散液10mM Tris-HCl, 1mM EDTA, pH值8.0)。 【自备仪器&耗材】

仪器自动版：涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅、96孔方孔圆底板、英芮诚ETP-300核酸提取仪、磁棒套。

手动版：涡旋混合仪、高速离心机、EP管、EP管用磁力架。 【仪器自动版操作步骤】

以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，可同步完成32个样本的提取工作。 1． 96孔板加液

参照下表用量向96孔板中分别加入相应试剂。

样本位 试剂 1、7 磁珠悬浮液 75μL 2、8 异丙醇 400μL 3、9 清洗液 600μL 4、10 80%乙醇 600μL 5、11 80%乙醇 600μL 6、12 洗脱液 100μL 样本量 200mg 200μL DNA提取范围 5~40μg 1~20μg 注：1）每次吸取磁珠悬浮液前尽量摇晃均匀；2）为提高效率建议使用排枪进行加液操作。

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磁珠法粪便基因组DNA提取试剂盒（加强版）

2． 样本裂解

1) 取约200mg固态粪便样本或约200μL液态粪便样本，置于EP管中，加入1mL裂解液1，涡旋振荡1min（须将管底粪便充分振荡起来），70℃裂解5min，期间颠倒混匀一次；

注：1）若欲提取较难裂解菌体的DNA（如革兰氏阳性菌），则于95℃孵育5min；2）如需去除RNA，请额外加入5μL RNase A溶液。

2) 加入500μL酚/氯仿/异戊醇，震荡混匀。12000rpm离心10min， 转移400uL上清至新离心管。

3) 加入10μL脱色缓冲液，颠倒混匀。

4) 加入250μL裂解液2，涡旋混匀，12,000rpm离心5min后待用。 3． 上机提取

从步骤2裂解完毕样本中吸取450μL上清液至加液完毕的96孔板第2/8列孔位中，将96孔板置于ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套，运行仪器操作软件，调用“粪便核酸提取”程序并执行。

“粪便核酸提取”程序参数设置如下，如仪器程序参数与说明书不一致，请以说明书为准： 步骤编号 1 2 3 4 5 6 7 8 孔位 1 2 2 3 4 5 6 3 运行类型 磁珠转移 DNA结合 DNA结合 清洗1 清洗2 清洗2 洗脱 弃磁珠 振荡时间(秒) 分离时间(秒) 挥发时间(秒) 振荡幅度 1 120 400 250 280 240 500 15 10 0 15 10 10 10 20 0 0 0 0 0 0 300 0 0 2 4 4 5 5 5 2 5 振荡强度 弱 强 弱 强 强 强 强 强 一组温度(℃) 0 0 0 0 0 0 60 0 二组温度(℃) 0 0 0 0 0 0 60 0 三组温度(℃) 0 0 0 0 0 0 60 0 四组温度(℃) 0 0 0 0 0 0 60 0 4． 核酸转移

程序运行完毕，取下96孔板，将洗脱液转移至干净的EP管或者PCR板中，提取过程完毕，此时可弃去96孔板。

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