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倒置荧光显微镜在医学研究生实验教学中的使用与管理

倒置荧光显微镜是近代发展起来的新式荧光显微镜，其由倒置显微镜和落射荧光装置组成，具有在培养皿或培养瓶内进行显微观察的特点，可实现活体细胞和组织、流质、沉淀物等的相差、荧光观察是科学研究工作中的理想仪器。所以，在医学科研型研究生的实验教学中，掌握倒置荧光显微镜的使用至关重要，只有正确的使用和妥善的管理倒置荧光显微镜，才能发挥它的功能和提高使用率，使之更好地为实验教学和科学研究服务。 一、倒置荧光显微镜的正确使用

倒置荧光显微镜是用于高端生物科学研究领域的多功能显微镜，其结构复杂且价格昂贵，因此，要想医学研究生正确掌握倒置荧光显微镜的操作使用规范，教师得首先在示范倒置荧光显微镜的实际操作之前，开设学习倒置荧光显微镜基本知识的课程，介绍倒置荧光显微镜的结构、原理、功能和基本使用方法，再在具体的使用操作中，针对不同的标本，示范不同的功能，由浅入深，逐渐使医学研究生对倒置荧光显微镜的操作使用规范化。

1.明视野观察的正确使用。倒置荧光显微镜的功能之一是明视野观察，其基本原理是标本经光线照射后，各部分对光吸收的不同而在明亮的背景中实现成像，主要适用于经染色或本身具有

颜色的细胞、组织切片等标本的观察。其基本步骤为：①打开外置白光电源供电器开关和倒置荧光显微镜左侧的白色按钮开关；②通过倒置荧光显微镜的左侧光强调节旋钮，调整到合适的照明亮度；③确认照明支柱上方的NCB11、ND、D滤光片推进光路；④旋转倒置荧光显微镜右侧的旋钮，使光路处于“EYE”位置；⑤调节目镜筒瞳距和屈光度；⑥旋转聚光镜转盘，将“A”档移入光路；⑦放置切片标本，通过旋转对焦手轮对标本进行聚焦；⑧用所需的放大倍数物镜观察标本。明视野观察是所有显微镜具备的功能，普通应用于科学研究中。医学研究生由于本科毕业于不同的院校，文化背景参差不齐，对显微镜的掌握程度不同，因此教师在实验教学过程中很有必要再次向他们灌输良好的使用习惯。另外，还要向他们讲解常见问题出现时应采取的策施。例如，接通电源开关而灯不亮时，可检查亮度控制按钮是否打开、电源线是否接触良好、灯泡是否烧坏；视场图像模糊时，可通过逐步移动物镜、目镜和载玻片来寻找原因；旋转亮度调节旋钮而亮度无变化时，可检查控制线是否正确连接。

2.相差观察的正确使用。倒置荧光显微镜的功能之二是相差观察，其基本原理是将样本不同部分的光程差转变为振幅差，经过带有相位片的相差物镜和带有环状光阑的聚光镜实现观测，主要适用于活细胞或不染色的组织切片观察。其基本步骤为：①打开外置白光电源供电器开关和倒置荧光显微镜左侧的白色按钮开关；②通过倒置荧光显微镜的左侧光强调节旋钮，调整到合适

的照明亮度；③确认照明支柱上方的NCB11、ND、D滤光片推进光路；④旋转倒置荧光显微镜右侧的旋钮，使光路处于“EYE”位置；⑤调节目镜筒瞳距和屈光度；⑥旋转聚光镜转盘，将合适的相差环转入光路（4X对应PHL，10X/20X对应PH1，40X对应PH2）；⑦放置细胞标本，通过粗微调机构对标本对焦；⑧用所需的放大倍数物镜观察标本。在实验教学过程中，除了正确引导医学研究生遵守相差观察的基本操作方法，同时更为重要的是引导他们对使用相差观察的标本认识和掌握。对他们来说，在日后的科学研究中，最为常用的是培养细胞的显微观察。但是学生在初入研究生阶段，可能对培养细胞的器材和细胞形态没有完整的认识，甚至都未真正接触，从而不能完全找到正确的视野和正确掌握相差观察的使用。这就要求教师在教学过程中明确地为研究生讲解细胞标本的制备方法，并告诉他们在观察时应注意的问题。首先，对于细胞器材的选择，一般建议使用玻璃材质和塑料材质的培养皿、培养板和培养瓶。它们多为无色透明，可直接在倒置荧光显微镜上进行观察，不用倒掉细胞液和经过其他处理。其次，在进行显微观察中，不要随意打开器材的盖子，以免污染细胞。最后，对于操作人员来说，需佩戴手套、口罩和白大衣，不仅可以保护自身健康而且可以防止细胞污染。

3.荧光观察的正确使用。倒置荧光显微镜的功能之三是荧光观察，其基本原理是利用激发光激发样本产生荧光，从而实现样本的形状与定位观察，主要适用于荧光标记样本的观察。其基本