内容发布更新时间 : 2024/5/9 2:56:19星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

ATBTM FUNGUS 3 IVD 酵母菌样真菌敏感性检测

概要和解释

在与微量稀释（根据EUCAST(1,6,8)以及NCCI.S(2,6)建议的参考方法）相似的条件下，在半固体培养基中，ATB FUNGUS 3试测定念珠菌属Candida和新型隐球菌Cryptococcus neoformans对于抗真菌剂的敏感性。

原理

ATB FUNGUS 3试条包括16对杯状凹cupules。第一对不含任何抗真菌剂，用作阳性生长对照。另外的15对包含不同稀释度的5种抗真菌剂，用于测定最小抑菌浓度（MIC）和（或）区分临床敏感性。 将准备好的待测酵母样真菌的悬浮液转移到培养基中，并接种到试条上。孵育后，我们可以通过肉眼判读，或者应用ATB仪器或mini API(自动判读软件稍后提供) 判读杯状凹中液体的生长情况，获得MIC（两性霉素B[AMB]，氟康唑[FCA]，伊曲康唑[ITR]，伏立康唑[VRC] 5氟胞嘧啶[5FC]）），和/或分为敏感，中介或耐药。

试剂包装（25份药敏性测验）

- 25个独立包装的ATB FUNGUS 3试条，包括干燥剂 - 25个孵育盖

- 25安瓿ATB F3培养基 - 25张结果记录单 - 1份说明书

成份

试条

ATB FUNGUS 3试条的成份在这份说明书最后的《质量控制》表格中有简要说明 培养基Medium ATB F2 培酵母氮基质Yeast Nitrogen Base 6.7g 养基 葡萄糖Glucose 6.5g 天冬酰胺Asparagine 1.5g 磷酸氢二钠Disodium phosphate 2.5g 三钠柠檬酸盐trisodium citrate 5.5g 琼脂agar 1.5g 软化水demineralized water 1000ml PH: 6.5－6.8 注意：ATB F2培养基的颜色在不同的安瓿中会稍有不同，但这并不会影响产品的性能。

必需但未提供的试剂和材料

试剂和仪器 - API?

0.85%氯化钠培养基(货号 20 070或 20 040 或 20 230)或API培养悬液（货号70700或70640或20150）

- McFarland标准（货号70 900）或DENSIMAT (货号 99 234)或ATB比浊仪

- ATB电子移液管（参照bioMérieux）或ATB接种器和管头（货号15 710）

- 带软件的ATB仪器（参照bioMérieux） 材料 移液管 - 安瓿保护套 - 安瓿架

- 气密容器，如GENbox密闭罐 - 普通微生物试验室设备

警告和注意事项

? 只供体外诊断 ? 只供专业人员使用

? 所有样品、酵母培养物和接种物应被视为有传染性的，并应对其进行正确处理。在整个试验过程中，要遵守无菌技术要求和通常使用的防范措施。可参照NCCLS M29-A中《保护试验室工作人员免受仪器生物公害和通过血液、体液、组织传染的疾病的侵害》的内容，以及1997年12月核准通过的指导方针。另外的防护措施，可参照《微生物和生物医学实验室的生物研究安全》HHS出版，No. (CDC) 93-8395,1993年5月第三版。或参照各国正在使用的规章执行。 ? 不要使用过期的试剂

? 在使用前要检查包装和部件是否完整

? 不要使用损坏的试条，如杯状凹变形，干燥剂袋开口等。

? 在使用前使培养基达到室温 ? 按下面指示小心打开安瓿瓶：

- 将安瓿放在安瓿保护套中

- 用一个手握住安瓿呈垂直位置（白色塑

料帽在上面）

- 尽可能地向下按塑料帽

- 用姆指的上部按住塑料帽平整部分

- 使用姆指从外部向塑料帽平整部分施加

的压力使帽子里安瓿的顶部破裂

- 把安瓿从保护套中取出，将保护套放在一边以备以后使用。

- 小心地拿开塑料帽

? 所提供的操作数据是通过使用本说明书指定的步骤获得的，对步骤的任何改变都可能会影响结果。 敏感性试验结果的解释和验证要考虑到病人的病史、样品的来源、菌株的鉴定，而且，如果需要的话，建议参考任何需要的附加实验结果和所有当地的适用的推荐。使用ATB专家系统有助于敏感性试验结果的解释和验证。

储存条件

在包装盒上指示的有效期前，试条和培养基应在2-8摄氏度下存放。

样品（收集和准备）

ATB BUNGUS 3试条不能直接用于临床或是其它样品。

用于鉴定的微生物，必须首先根据标准的微生物技术在合适的培养基上进行分离。可以使用下述bioMerieux的分离培养基： - Sabouraud琼脂

- Sabouraud琼脂加2%的葡萄糖（EUCAST (1, 8.) 和 NCCLS (2)推荐的培养基） - Sabouraud庆大霉素和氯霉素琼脂 - 白色念珠菌ID2琼脂 - CPS ID2琼脂 - 哥伦比亚琼脂加5%羊血

- Trypcase胰酶大豆琼脂加5%马血 - 巧克力琼脂加PolyviteX - BCP琼脂

使用说明

试验的准备

? 从包装中取出试条

? 在试条延长翼上记录下被测试酵母菌株的编号 接种物的准备

? 打开一个API?

0.85%氯化钠培养基安瓿（或API培养悬液），打开方法如本说明书“警告与注意事项”中所示。

? 采集不超过4天的菌落(colonies)，制备成浊度相当于2 McFarland的悬浮液。

? 用McFarland试剂盒的标准浊度管比较，或使用ATB比浊仪DENSIMAT（参考使用手册）。 ? 此菌悬液必须在准备后立即使用。

注意：保证接种物的纯度，如果是混合培养，要进行分纯。

? 使用一移液管转移20μl 此悬浮液到一ATB F2培养基的安瓿中。 试验条的接种 ? 手工接种

- 用ATB电子移液管混匀ATB F2培养基，避免产生气泡。

- 使用ATB电子移液管在每个杯状凹中加入

135μl 的 ATB F2培养基（大约3*104

酵母

菌/毫升 或 4*103

酵母菌/杯状凹）。 ? 自动接种

参考ATB接种器使用者手册 ? 盖好试条盖子

? 把试条放入一个密封容器或是一个装有吸潮纸的GENbox型广口容器里

? 在有氧条件下35°C (+ 2°C)的环境中，念珠菌属要培养24小时（+2h），新型隐球菌要培养48小时（+6小时）。

判读和解释

1. MIC的测定（AMB, FCA, ITR, VRC）： ? 通过肉眼判读或是使用ATB仪器或miniAPI?（参考使用手册）自动判读来观察生长情况 ? 肉眼判读前，建议把试条放在黑暗的背景下（可从bioMerieux得到ATB FUNGUS 3可视化判读器）。对于每一个抗真菌制剂，从低浓度开始，与生长对照杯状凹比较，在结果记录纸上记下每一个杯状凹的生长得分。 定义 得分 和生长对照完全一样 4 比生长对照有轻微减少 3 比生长对照孔明显减少 2 非常微弱的生长 1 没有生长 0 - 对于两性霉素B，最小抑菌浓度（MIC）应该判断为生长完全受抑制的测试杯的浓度（即得分为“0”的测试杯）

注意：在杯状凹外围存在一个（或几个）散在的菌落或生长迹象，应记录为“1”分。 - 对于氟康唑（FCA）,伊曲康唑（ITR）和 伏立康唑（VRC），鉴于可能存在拖尾生长，最小抑菌浓度（MIC）对应的测试杯得分可以是“2”，“1”，或是“0”分。

注意：在杯状凹外围的生长迹象应记录为“0”或“1”分。

2．氟胞嘧啶（5FC）的解释：

? 通过肉眼判读或是使用ATB仪器或miniAPI?（参考使用手册）自动判读来观察生长情况。 针对5氟胞嘧啶有两个浓度的检测：

生长得分 结果 敏感性 c C c C 0 / 1 / 2 0 / 1 / 2 – – S 敏感 3 / 4 0 / 1 / 2 + – I 中介 3 / 4 3 / 4 + + R 耐药 注意： ? 此处的得分定义跟上面MIC测定得分定义相同。

?

在杯状凹外围的生长迹象应记录为“0”或“1”分。 3.分界点： CLSI/NCCLS推荐的念珠菌属(4)的分界点（单位为mg/l） S I R 氟胞嘧啶 ? 4 8-16 ≥ 32 两性霉素B* ND ND ND 氟康唑 ? 8 16 - 32 ≥ 64 伊曲康唑 ? 0.125 0.25 - 0.5 ≥ 1 伏立康唑 ?1 2 ?4 ND:CLSI/NCCLS没有定义

注意：

- 由于克柔念珠菌candida krusei对氟康唑Fluconazole天然耐药，试验结果应被系统地解释为R。

*：对于两性霉素B （Amphotericin B (AMB)），MIC ≥2 mg/l，建议判断为抵耐药（2）。 以下数据仅供参考（非官方推荐）： 新型隐球菌Cryptococcus neoformans的分界点（单位为mg/l） S I R 氟胞嘧啶 (5) ? 4 8 - 16 ≥ 32 两性霉素B* ND ND ND 氟康唑 (6) ? 4 8 ≥ 16 伊曲康唑 ND ND ND 伏立康唑 ND ND ND ND:没有定义 ( ): 参考文献

注意：

- *：对于两性霉素B （Amphotericin B (AMB)），MIC ≥2 mg/l，建议判断为耐药，(新型隐球菌通常的MIC为0.5和1 mg/l。)

注意：

? 在自动读取数据前，建议擦拭试条的中间部分，去除可能存在的小滴液体，以便仪器辨认试条代码。

? 一个或两个生长对照杯状凹中的生长缺失时，测试无效，必须重复进行。

? 在培养后，带有脱水的杯状凹的试条可能给予错误结果，必须重复测试。

? 对于两性霉素B （Amphotericin B (AMB)，在自动判读时，建议肉眼检查在杯状凹外围是否有个别菌落或生长（得分为“1”）。

? 对于氟康唑(FCA)和 and Itraonazoe伊曲康唑(ITR)和伏立康唑（VRC），用ATB FUNGUS 3所获得的“I”分类相当于NCCLS(2)定义的SDD（剂量依赖型敏感Susceptible

Dose-dependent）。

质量控制

为了保证所描述方法的标准化，应使用指定用于此试条的试验菌株来进行质量控制（参考该说明书最后的质量控制表）。

按照所有当地应用的规则，进行质量控制是使用者的责任。

方法的局限性

? 不同的操作环节之间间隔时间过长（从接种液的配制到试条的培养）可能会影响结果。 ? 只能使用纯培养物（pure cultures），混合的或是污染的培养物可能会影响结果。

? 由于Candida haemulonii的生长不稳定干扰MIC的判断，故不能使用ATB FUNGUS 3条对

其做检测。

? 在检测白假丝酵母菌，都柏林假丝酵母菌和热带念珠菌时，氟康唑，伊曲康唑和伏立康唑可出现拖尾现象，导致MIC偏高，尤其在使用仪器判断结果的时候。针对这三个药建议肉眼判读其MIC值，特别是当伏立康唑结果耐药时（因为对伏立康唑耐药的非常少见）。

? 针对光滑念珠菌的检测，建议将其对氟康唑和/或伊曲康唑敏感的结果改为中介，因为该菌对这两个药存在固有的敏感性低的现象。

预期结果的范围

由于抗真菌试验的耐药谱根椐地理区域的不同而变化，因此，预期结果直接取决于当地的微生物生态环境（种类/耐药机理）。

性能

ATB FUNGUS 2试条的性能通过使用3组菌株完成，包括以下种类的酵母菌。

- 白色假丝酵母菌Candida albicans - 都柏林酵母菌Candida Dubliniensis - 无名假丝酵母Candida famata

- 光滑假丝酵母菌Candida glabrata - 高里假丝酵母菌Candida guilliermondii - 乳酒假丝酵母Candida kefyr