内容发布更新时间 : 2024/4/20 9:04:43星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
一、名词解释
1、氨基酸的等电点 氨基酸是两性电解质，在碱性溶液中表现出带负电荷，在酸性溶液中表现出带正电荷，在某一定pH溶液中，氨基酸所带的正电荷和负电荷相等时的pH,称为该氨基酸的等电点。 2、兼性离子 蛋白质在溶液中的游离状态受溶液pH值的影响,在酸性环境中,蛋白质分子电离成阳离子,在碱性环境中,则电离成阴离子,蛋白质在某一pH值的溶液中所带正、负电荷的量相等时,被称为兼性离子(两性离子)。
3、分配层析 分配色谱系色谱法之一种，利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。
4、盐析 随着溶液的盐浓度升高，例如达到饱和或者半饱和的状态，蛋白质的溶解度逐渐降低，蛋白质分子彼此聚集而沉淀下来，这种现象叫做盐析。
5、离子交换层析 离子交换层析是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。 6、肽平面 X射线晶体衍射研究表明，与肽键相连的亚氨基、羰基和两端的α-碳原子构成了一个肽基，形成了一个近似平面，该平面成为酰胺平面或肽平面。
二、填空题
1.在蛋白质和多肽分子中，连接氨基酸残基的共价键有 二硫键 和 肽键 。
2.组成蛋白质的氨基酸中，含吲哚基的氨基酸是 色氨酸 ，含咪唑基的氨基酸是 组氨酸 ，含胍基的氨基酸是 精氨酸 。
3.常用的使蛋白质沉淀的方法有 盐析 、 有机溶剂沉淀 、 等电点沉淀 、 重金属盐沉淀 和 加热凝固 。
4.谷胱甘肽由三种氨基酸通过肽键连接而成，这三种氨基酸分别是 谷氨酸 、半胱氨酸
和 甘氨酸 。 5.在pH=6.0时，将一个丙、精、谷三种氨基酸的混合液进行电泳，移向正极的是 谷氨酸 ，留在原地的是 丙氨酸 。
三、判断题
1、导致蛋白质在280nm处有最大吸收的三种氨基酸是Trp、Phe和His。×
2、长肽或蛋白质的酸碱性质主要取决于可解离侧链基团。 √
3、赖氨酸、精氨酸和组氨酸都是碱性氨基酸，在pH7时携带正电荷。 √
4、人体中也存在D型氨基酸。 ×
5、氨基酸只在等电点处有缓冲作用。 × 四、选择题
1、蛋白质是两性电解质，当蛋白质处于等电点是，其（ B ） A. 溶解度最大 B. 溶解度最小 C. 和溶解度无关
2、下列关于蛋白质的论述，错误的是（ D ）
A. 组成蛋白质的氨基酸的所有氨基都在α位上 B. 蛋白质中的氨基酸之间以肽键相连 C. 有些蛋白质带有寡糖或脂的片段
D. 在生理pH时组成蛋白质的氨基酸的侧链所带的电荷的代数 3、下列氨基酸中，属于含硫的极性氨基酸的是（ B ） A. Met B. Pro C. Cys D. Phe
4、蛋白质X的分子量为140000，等电点为pH5.4，蛋白质Y的分子量为150000，等电点为pH8.6，我们选取哪种方法将它们分离？（ C ） A. 分子筛 B. 半透膜渗透 C. 离子交换色谱 D. 硫酸铵分级沉淀
5、下列哪种是蛋白质溶液稳定的因素？（ C ） A. 酰胺平面 B. 水化膜 C. 螺旋结构 D. 异性电荷 五、问答题
+
1、计算赖氨酸的ε-NH3 20%被解离时的溶液pH。
2、计算天冬氨酸（pK1=2.09，pK2=3.86，pK3=9.8）及赖氨酸（pK1=2.18，pK2=8.95，pK3=10.53）的pI值。
3、假定有1mmol的五肽，酸水解生成2mmoll谷氨酸，1mmol赖氨酸，没有能够定
量回收其他氨基酸。将原来的五肽用胰蛋白酶水解生成两个肽段，在pH7.0进行电泳，一个肽段移向阳极，另一个则移向阴极。用FDNB（二硝基氟苯）处理胰蛋白酶水解的一个肽段，再用酸水解，生成DNP-谷氨酸。用糜蛋白酶处理原来的五肽生成两个肽段及游离谷氨酸。试从上述试验结果写出该五肽的氨基酸序列。
4、一纯净的、新的蛋白质，在10mmol/L2-巯基乙醇存在下，经SDS-PAGE检测，观察到相对分子质量为34000和26000的两条蛋白带。但凝胶过滤柱层析表明这种新蛋白质的相对分子质量为24000。如果在6mol/L盐酸胍存在下，用该柱层析分离只能得到相对分子质量为60000的蛋白峰。根据上面信息，关于该蛋白质的结构你能得出什么样的结论？
5、在蛋白质的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中要加入十二烷基硫酸钠（SDS），请说明理由。
一、名词解释
1. 氨基酸的等电点：使氨基酸成为带有等量正负电荷的离子的pH。处在等电点的氨基
酸的净电荷为零，此时氨基酸解离为正负离子的趋势是相同的。
2. 兼性离子：也称为偶极离子，指具有两个以上的可离子化的基团，且总电荷为零的
化合物。
3. 分配层析：一种基于混合物各组分在固定相和流动相的分配系数不同将其分开的技
术。
4. 盐析：大量中性盐使蛋白质从溶液中析出的现象。
5. 离子交换层析：利用不同的生物分子的带电部分与具有相反电荷的离子交换剂之间
的作用强度不同分离生物分子。
6. 肽平面：由于肽键具有部分双键性质，使得肽基的6个原子共处一个平面，称为肽
平面。
二、填空
1. 肽键，二硫键 2. Trp， His ，Arg
3. 盐析、等电点沉淀、有机溶剂沉淀、离心沉淀、聚乙二醇沉淀 4. Glu、Cys、Gly 5、Glu，Ala 五、问答题
1. pH=pKa +lg[ε-NH2]/[ε-NH3+]=10.53+lg(0.2/0.8)=9.93 2. Asp的pI=（pK1+pK2）/2=2.97 Lys的pI=（pK2+pK3）/2=9.74
3、（1）已知5肽的组成为2Glu+1Lys，另两个位Trp，因Trp酸水解遭到破坏，所以不能测出。 （2）用糜蛋白酶水解获得两个肽段和一个游离Glu，说明两个Trp位于第2、4位，Glu
位于第5位。
（3）用胰蛋白酶水解获得两个肽段，推测Lys位于第3位，FDNB处理得到Glu，说
明第1位为Glu，则肽段顺序为Glu-Trp-Lys-Trp-Glu。
（4）在pH7时，一个肽段移向阳极，一个移向阴极，说明第一个氨基酸不是Glu而是Gln，
才符合题意，所以该序列是Gln-Trp-Lys-Trp-Glu。
4、该蛋白为寡聚蛋白。由（αβ)4组成，其中α，β亚基相对分子质量分别为34000和
26000.αβ之间有二硫键连接，其αβ单体相对分子质量为60000。
5、（1）蛋白质颗粒在各种介质包括聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移率决定于它所带净电荷以及分子大小和形状等因素。
（2）十二烷基硫酸钠（SDS）是有效的变性剂。SDS使多肽链覆盖上了相同密度的负
电荷，该电荷量远大于蛋白质分子原有的电荷量。结果所有的SDS-蛋白质复合体，电泳时都以相同的电荷、蛋白质质量比向正极移动。
（3）加入SDS后的聚丙烯酰胺凝胶电泳中，迁移速率主要取决于蛋白质的相对分子质量。