内容发布更新时间 : 2024/11/5 18:51:53星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
8、精液稀释的主要目的是什么?稀释液成分可分哪几类?不同类型的保存方法在稀释液成分上有什么区别? ⑴精液稀释的目的:
①用稀释液对精液进行稀释,扩大精液容量,延长精液保存时间。
②将精液加以稀释后,就可以扩大输精头数。,以提高优良种公牛的利用率。 ③延长精子存活时间和保持受精能力。 ⑵稀释液的种类与成分上的区别:
①常温现用稀释液:脱脂灭菌牛奶,糖类溶液,盐类溶液,抗生素。以单纯糖容量为目的,可以简单的等渗的糖和奶液为主。
②常温保存稀释液:盐类溶液,糖类溶液,抗生素。短期保存为目的,以糖和弱酸盐为主,PH偏酸
③低温保存稀释液:葡萄糖,蒸馏水,无机盐和卵黄。低温保存,含卵黄或奶液为主,抗冷休克。
④冷冻保存稀释液;需加冷冻保护剂。超低温保存,含甘油、二甲基亚矾为主,乙二醇抗冻。
⑤稀释液的成分:A 稀释剂;B 营养剂;C保护剂;D抗生素;E添加剂如激素,酶,维生素,咖啡因,ATP,精氨酸等。
9、试述精液的低温保存和常温保存的原理? ⑴ 低温保存的原理
①降低精液代谢强度,延长保存时间
②加入抗低温物质,防止冷休克以及低温对细胞造成损伤 ③抑制微生物生长 ④补充营养物质 ⑵ 常温保存的原理
①补充营养物质 稀释液中含有营养物质 ②中和酸性物质 ③维持渗透压
④稀释精子代谢产物
10、怎样计算精液的稀释倍数?怎样计算冷冻精液前稀释倍数?
①稀释倍数:稀释倍数根据精液内精子的密度,精液量、精子活力、和输精动物的数量和稀释后每毫升精液应含的精子数来确定,以保证授胎。
②在原精液的活力合格的前提下,决定精液最终稀释倍数的因素有三个方面: A、原精液的精子浓度
B、用于输精的每份精液的体积或重量 C、每份精液的总精子数
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计算精液的稀释倍数最终的目的是得到原精液经过稀释最终达到的体积或重量,以及可分装的份数。
例:活率≥0.8的精液,一般按每个输精剂量含0.5-0.6亿个总精子,输精量为0.05ml确定稀释倍数,如:某只公鸡一次采精量是0.5ml ,活力为0.85,密度为35亿/ ml,要求每个输精剂量是含0.5亿精子,输精量为0.05ml,则总精子数为0.5ml×35亿/ml=17.5亿,输精头份为17.5亿÷0.5亿=35份,加入稀释液的量为350×0.05ml-0.5ml=17ml;
11、试述精液冷冻保存的意义。
①它解决了精液长期保存的问题,使输精不受时间、地域和种畜生命的限制。 ②冷冻精液便于开展国际、国内种质交流。
③冷冻精液的使用极大地提高了优良公畜的利用效率,加速品种育成和改良的步伐,同是也大大降低了生产成本。 12、冷冻精液的原理是什么?
(1)冷冻的目的:降低温度以降低代谢强度,延长保存时间 (2)冷冻对精液的影响
①精子内水分形成冰晶,对细胞器产生机械损伤;
②在精子内水分形成冰晶时,细胞内局部电解质浓度过高,引起蛋白质变性和渗透压升高。
(3)加入冷冻保护剂作用
①防止冷冻过程中形成大冰晶,使细胞液处于玻璃化状态,避免大冰晶对精子造成损伤; ②防止水分形成大冰晶,造成原生质局部脱水,破坏细胞器结构; ③降低冰点温度,使水分缓慢排出;
④在冷冻过程中,在0-60摄氏度快速降温,减少冰晶体积; ⑤稀释电解质浓度,降低精子的活动;
⑥排出细胞内部分盐,避免冷冻时水分外流而导致细胞内离子浓度过高而引起的蛋白质变性。
13、试述冷冻精液制作的基本程序。 ⑴ 稀释液的配制
①冷冻稀释液:取80ml 5.7%蔗糖溶液,加入20ml卵黄液,配成100ml含卵黄20%的冷冻稀释液液,加入0.003g青霉素,0.005g链霉素,摇匀,4℃预冷保存。
②冷冻保护剂:甘油、DMSO、二酰基乙酰胺。甘油冷冻保护液:取出17.2ml冷冻稀释液,加上2.8ml的无水甘油,配成含甘油14%的冷冻保护剂液, 充分摇匀后,4℃预冷保存。 ⑵ 精液采集
采用背腹式按摩法采集种公鸡精液,采集过程中要求精液无粪便,无血液,饲料等污染。
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采集后用棉花和纱布包好,置于保温杯中,送回实验室处理。 ⑶ 精液的稀释 ⑷ 精液品质检查 ⑸冷冻精液制作
鲜精经过品质检测合格后,方可进行冷冻精液的制作。
①精液冷冻前的准备:取1ml的鲜精,用相同温度的冷冻稀释液进行1:3的稀释后,然后用纱布包上10层,放在0-5℃左右的冰箱中预冷1小时左右,再用相同温度的含甘油的冷冻保护剂(或含有DMSO的冷冻保护液)进行1:1的稀释。
②接着在5℃的冰箱中进行平衡2个半小时。平衡时间可以在1个小时至3个小时内变动。
③精液冷冻:用泡沫盒盛装液氮,在距离液氮面1–2cm处架上铜丝网,待铜丝网充分冷却后,用移液枪开始滴冻,每滴0.25ml。滴冻后加盖,熏蒸2 分钟,然后将颗粒浸入液氮中。
14、哪些因素会影响精液的最终稀释倍数? ①精子活率 ②精子密度 ③输精动物的数量
④稀释后每毫升精液应含的精子数
15、分析在人工授精过程中,哪些环节可能会造成精液的污染?
⑴精液的污染通常是在采精的过程中,空气中的尘埃,使用不干净的器皿和卫生条件不佳,尿液粪便等因素造成。
⑵在采集种精液时,由于难以做到严格的无菌操作或是种公畜隐性感染了某种疾病,往往在精液中容易污染细菌,特别是在冷藏条件下仍能生长繁殖的细菌,即使加进了大量抗生素仍能快速生长,从而影响精液质量。
16、冷冻精液的解冻温度和解冻后的精液温度有何区别?
颗粒精液解冻温度是经预热至40℃的解冻液的温度,细管精液的解冻温度为解冻时所要求的水温。解冻温度影响冷冻精液的解冻效果。精液解冻后应立即进行输精。 17、如何提高人工授精的受胎率? ⑴确保精液质量
精液的品质是影响受精卵数目的决定性因素。要提高精液的品质, 除了选择繁殖力高的公畜外,应注意以下几点:
①精液经稀释或低温保存后,都会随时间的延长而使受精能力降低。因此,稀释后的精液应缩短保存时间,一般不宜超过24小时,存取时严防温度的剧烈变化,若温差在1~2℃上波动时就会减少精子的成活率。
②精液稀释后,需采取措施使温度保持在17~18℃之间,直到输精完毕。
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③稀释浓度不能太低,一般要求每毫升精液中含精子数1~3.67亿个。 ⑵适时授精
母畜排卵后,如不能及时完成受精过程,随着时间的延长,受精能力就会降低。因此,做好发情鉴定、适时授精至关重要。哺乳动物母畜发情时一般表现为食欲减退、鸣叫不安、跳槽扒圈、外阴充血、红肿、流出粘液,频频排尿,触摸背部举尾不动。掌握发情,排卵时间适时配种应。另外,对不同年龄的母畜配种时间也不尽相同,一般为“老配早,小配晚,不老不小配中间”。 ⑶严格输精操作规程
输精是人工授精最后一个技术环节,关系到能否获得较高的受胎率。因此,必须做好输精前的各种准备工作: ① 严格消毒所有输精器械。
② 冷冻精液解冻后不宜存放时间过长,应在1小时内输精。所输精液的活力在0.5级以上。
③用0.1%高锰酸钾溶液清洗母畜外阴,以免因输精而引起母畜生殖道疾病。 ④在母畜发情24小时内输精,有效精子数要保证在10~20亿个,间隔8~12小时后,再输精一次。
⑤输精时不要强行压入,将输精管沿阴道上壁缓慢推进子宫内输入精液。
⑥输完精后慢慢取出输精管,对于猪来说,要用手压母猪背腰部片刻,或用手轻重适中地拍打母猪背腰部3~4次,以防精液倒流。
18、为什么说精液品质检查是确保可靠的人工授精受胎率的重要措施?
经过精液品质检查可以决定精液样品的取舍。
⑴ 外观评定,可以发现色泽,气味异常的精液。防止疾病传播,减少空怀。 ⑵ 通过显微评定,检测精子活率,精子密度,精子形态等可以确定精液的稀释倍数,保证输精时的有效精子数量,从而保证有较高的受胎率。 19、通过哪些途径可以提高采集精液的品质?
⑴加强育种和饲养管理。后备公猪不宜过早用于配种,老龄公猪和精液质量不良经治疗无效的公猪应及时淘汰。 防止过于消瘦或过肥,夏季注意防暑降温。 ⑵合理调教。
⑶严格按照采精的操作规程。 ⑷防止采精过于频繁或频率过低。 ⑸采精用具要清洁卫生,防止精液污染。
⑹采得精液后,要迅速置于30℃左右的恒温水浴中,以防止温度突然下降对精子造成低温打击。
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