内容发布更新时间 : 2024/12/26 1:25:57星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

25℃预热后，逐管加入0.5ml 0.1mol/L的H2O2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。 3.结果计算：

以1min内A240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。

?A240?VT过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=

0.1?V1?t?FW

(AS1?AS2)式中 ?A240 = AS0－ 2

AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值；

AS1， AS2—样品管吸光值； Vt—粗酶提取液总体积（ml）； V1—测定用粗酶液体积（ml）； FW—样品鲜重（g）； 0.1—A240每下降0.1为1个酶活单位（u）； t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。

高锰酸钾滴定液的配制和标定

1．高锰酸钾滴定液（0.1mol／L）的配制

市售高锰酸钾常含有少量MnO2等杂质，蒸馏水也常有微量的灰尘，溶液在配制初期不够稳定，浓度常降低，因此高锰酸钾溶液不能用直接法配制，所以先配制成近似所需的浓度。 【1】方法：称取稍多于理论用量的固体高锰酸钾，用新煮沸并冷却的蒸馏水溶解，放置两天以上或加热至沸，并保持微沸15min，使各种还原性物质完全氧化，用垂熔玻璃器过滤，除去MnO2等沉淀，摇匀，储存于棕色瓶中，暗处密闭保存。

【2】操作步骤：称取高锰酸钾16g，加蒸馏水1000ml，煮沸15min、放冷，转人棕色瓶中密闭避光保存，2天后过滤待标定。

2．高锰酸钾滴定液（0.1mol／L）的标定 基准物： Na2C2O4

在硫酸（0.5～lmol／L）溶液中，加热至75～85C时反应如下： 2MnO4-＋5C2O4-＋16H+→2Mn2+＋10CO2↑＋8H2O

但溶液温度低于60℃，反应速度较慢，如温度高于90℃时，则草酸钠会分解，使测定结果偏高。

操作步骤：称取恒重的基准物Na2C2O4约0.2g，加新煮沸过的冷蒸馏水20ml、3mol/L的 H2SO4 10ml使溶解，加热至75℃，自滴定管中逐滴加人待标定的高锰酸钾溶液，滴定至溶液显微红并保持30秒不褪色为终点。当滴定完成时，溶液温度应不低于55℃。

C高V高=2/5 *（m草/M草）

过氧化氢配制和标定

一、实验原理

酸性介质、室温下：

5H2O2+2KmnO4+4H2SO4→5O2↑+2KHSO4+MnSO4+8H2O

KMnO4为自身指示剂，终点颜色：微红色（半分钟内不裉色） 二、实验步骤

1．H2O2溶液的配制

移取H2O2溶液4.9 mL置于500mL容量瓶中，加水稀释，定容，摇匀。 2．H2O2含量的测定

移取配制得到的H2O2溶液20.00mL于锥形瓶中，加入3mol.L-1H2SO4 5mL，用KMnO4标准溶液滴定到溶液呈微红色，半分钟不褪色即为终点。平行三次。

计算公式：

C过V过=5/2 *C高V高

备注

一、磷酸缓冲液

储备液A：0.2M Na2HPO4溶液（53.65g Na2HPO4*7H2O或71.7g Na2HPO4*12H2O配成1000ml） 储备液B：0.2M NaH2PO4溶液（27.8g NaH2PO4*H2O配成1000ml）

ｘml A +ｙmlB，稀释至200ml.即为0.1M磷酸缓冲液 pH值 5.7 5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 0.2mol/LNa2HPO4溶液（mL） 6.5 8.0 10.0 12.3 15.0 18.5 22.5 26.5 31.5 0.2mol/LNaH2PO4溶液（mL） 93.5 92.0 90.0 87.7 85.0 81.5 77.5 73.5 68.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 37.5 43.5 49.0 55.0 61.0 67.0 72.0 77.0 81.0 84.0 87.0 89.5 91.5 93.5 94.7 62.5 56.5 51.0 45.0 39.0 33.0 28.0 23.0 19.0 16.0 13.0 10.5 8.5 7.5 5.3