内容发布更新时间 : 2024/6/25 14:08:17星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

◆ 贴壁细胞的裂解：

① 弃尽培养液，向每 10 cm2的贴壁细胞中加入 1 ml PBS，用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞，转移至1.5 ml Tube 中，5,000 rpm 离心 5 分钟，弃上清，加入 200 μl 的灭菌水或 PBS 溶液悬浮细胞。

② 加入 180 μl Buffer GB、20 μl 的 Proteinase K 和 10 μl 的 RNase A（10 mg/ml），收集细胞悬液，充分吸打混匀，于 56℃水浴温浴 10 分钟。 ③ 向裂解液中加入 200 μl 100%乙醇，充分吸打混匀。

2. 将 Spin Column 安置于 Collection Tube 上，溶液移至 Spin Column 中，12,000 rpm 离心 2 分钟，弃滤液。

3. 将 500 μl 的 Buffer WA 加入至 Spin Column 中，12,000 rpm 离心 1 分钟弃滤液。

4. 将 700 μl 的 Buffer WB 加入至 Spin Column 中，12,000 rpm 离心 1 分钟，弃滤液。 注）请确认 Buffer WB 中已经加入了指定体积的 100%乙醇。 请沿 Spin Column 管壁四周加入 Buffer WB，室温静置 5 分钟，这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。 5. 重复操作步骤 4。

6. 将 Spin Column 安置于 Collection Tube 上，12,000 rpm 离心 2 分钟。 7. 将 Spin Column 安置于新的 1.5 ml 的离心管上，室温下静置 2 分钟，在 Spin Column 膜的中央处加入 50～200 μl 的灭菌水或 Elution Buffer，室温静置 5 分钟。注）将灭菌水或 Elution Buffer 加热至 65℃使用时有利于提高洗脱效率。 8. 12, 000 rpm 离心 2 分钟洗脱 DNA。 如需获得更大收量，可将离下液重新加入到 Spin Column 膜的中央或再加入 50～200 μl 的灭菌水或Elution Buffer，室温静置 5 分钟后，12,000 rpm 离心 2 分钟洗脱 DNA。

9. 基因组 DNA 定量。提取得到的基因组 DNA 可通过电泳或吸光度测定以定量。

裂解不充分，DNA 未充分释放，建议要延长裂解时间（过夜裂解）或增加裂解液的量；

当实验材料量超出说明书的要求用量时，可以加大 Buffer GL 或 Buffer GB 的用量，裂解后分到两个 Collection Tube 中进行实验操作。