内容发布更新时间 : 2024/5/20 6:43:31星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

陈金龙

1、 荧光基本原理

荧光是发光体分子中原子的核外电子由高能级回跳到低能级所产生的辐射。某些物质吸收了与它本身的特征频率相同的光量子后，其原子中的电子被激发到较高的能级，从而产生吸收光谱。有些物质，当用紫外光线照射时，它吸收了某种波长的光后还会发射出各种颜色和不同强度的光；而当紫外线停止照射后，这种光也随之消失，这种光称为荧光。荧光是跃迁到激发态的电子直接从单重激发态以辐射方式跃迁到基态所发射的光。荧光的波长比吸收的紫外线的波长要长些。由于物质的分子结构不同，所吸收的紫外线和所发射的荧光的波长也不同。被这些物质吸收的紫外线称为激发光，产生的发射光即荧光。物质的荧光有两种：自发性荧光和诱发荧光。后者常用，能产生荧光的生物染色剂称为荧光染料或荧光探针，组织或细胞的荧光染色只有在配备了适当光源的荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜下才能显示和观察。 2、 常见染料种类

荧光染料泛指吸收某一波长的光波后能发射出另一波长大于吸收光的光波的物质。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。荧光分子探针主要包括荧光基团、连接基团和识别基团。荧光基团是发出光学信号的信息源,识别基团是可以与待检测物特异性结合的基团,而连接基团是连接荧光基团和识别基团的部分。

常规的荧光染料：1）小分子。香豆素；酞菁染料；异硫氰酸酯类（异硫氰酸酯荧光素 FITC,罗丹明RhB,Rh6G）；罗丹明（RhB, Rh6G）；青色素染料。2）稀土金属复合物：Tb（绿），Eu（红）3）量子点：半导体纳米晶体（ZnS@CDSe QDs）4）金属纳米簇：Au，Ag，Pt，Cu。5）碳纳米材料：石墨烯，石墨烯量子点(GQDs)，C60，单壁碳米管（SWNTs） 非常规荧光染料：多光子和上转换；聚集诱导发光效应（AIE） 3、分析化学药物分子相关期刊名目

Trends in Pharmacological Sciences 、Nature Reviews Molecular Cell Biology、Journey of American Chemical Society、Chemical Communications、Organic letters 、Molecular Pharmacology、medicinal research reviews、Biological & Pharmaceutical Bulletin、Tetrahedron Letters、Talanta、Drug Metabolism and Disposition、Analytical Chemistry ,The Analyst，Journal Chromatography A，Journal Chromatography B(荷兰)，ABC(Analytical and Bioanalytical Chemistry), Electrophoresis , science ,nature , CNKI, Analytica Chimica Acta, Journal of Separation Science, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, Analytical Sciences, Chromatographia , Analytical Letter , Journal of Chromatographic Science , Chinese Journal of analytical chemistry国内：药学学报、药物分析杂志、中国药学杂志等

丁黎

1、生物样本种类，特点，及前处理方法

1）血液。分为血浆/血清或全血。测定血浆或血清中的药物浓度能较好的反映体内药物浓度变化。若专门测定平均分布于血细胞内外的药物浓度，则用全血。血浆采集应加入抗凝剂。离心，取上清液，血清静置，移走血饼，离心，取上清液。处理方法有沉淀蛋白法、液液萃取法、固相萃取法。2）尿样，用于药物剂量回收研究、药物尿清除率、生物利用度研究。易收集，但易受生理情况影响。方法：酸解或酶解可使药物从缀合物中游离出来。3）唾液：易收集，采集后应立即出去泡沫部分的体积，放置后易分层，离心，取上清液。4）组织：为药物的吸收、分布、代谢、排泄等体内过程提供重要信息。组织处理方法：匀浆化法，蛋白沉淀法，酸碱水解，酶水解5）头发：取样方便，无伤害，检样的掺伪可能性低，可测微量元素。头发采集后需洗涤，处理方法有提取法，有机破坏法。6）其他：乳汁，精液。

2、生物样品前处理方法及特点

1）有机破坏法：包括湿法破坏、干法破坏和氧瓶燃烧法，适合人发样品的破坏破坏能力强，反应激烈。2）直接沉淀法：将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清液进样。当样品中待测物浓度较高，所用方法的特异性和灵敏度达到检测要求时可以考虑用直接沉淀法。注意沉淀剂体积、沉淀剂的选择及对药物稳定性的影响（氧化、酸不稳定）。可使接合型药物释放出来，缺点容易乳化。3）液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋，离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。多数药物亲脂，在适当有机溶剂中溶解度大于水相，而血样或尿样中含有的大多数内源性杂质是强极性水溶性物质，液液萃取可除去大部分杂质，从大量样品中提取药物经浓集后用于分离。注意水相pH值，提取溶剂以及有机相和水相的体积，优点在于选择性，这依赖于有机溶剂的选择。药物能与多数内源性物质分离，缺点在于乳化现象的产生：有机溶剂易挥散、有毒性、对环保不利及不能自动化。

4）固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到吸附或分配或离子交换或其它亲和力作用时，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂洗出杂质，再用适当溶剂洗脱药物。注意流速、进样量、缓冲液pH及用量。SPE中萃取剂与样品有很大的接触面，因此可以再短时间内有效萃取，可采用动态柱操作，可自动化，可避免乳化，柱子可弃无污染。缺点在于价格昂贵，技术要求高，批间差异大，柱子易阻塞影响分离。5）膜萃取：将膜看成是两相间的选择性屏障，在膜两侧施加一驱动力时，药物就会从一侧（供给相）迁移到另一相（接受相）。供给相的流速对萃取效率有很大影响。不仅可以实现样品分离，由于材料众多，还有高选择性，易自动化。

3、体内药分评价指标及标准

1）特异性：6个不同个体的空白生物基质，必须证明所测定物质是受试药品的原型药物或特定活性

代谢物，生物样品所含内源性物质或其他代谢物及其他药物不得干扰对样品的测定。2）标准曲线和定量范围：至少6个点，应使用与待测样品相同的生物基质，加权最小二乘法。注意：定量范围应查文献，结合预实验结果确定；标曲浓度点等差或等比；线性两个九，每个浓度点的理论浓度和加入浓度的差异，最低点小于20%；用于评价干扰，要随行空白；待测样品浓度超出标曲范围时，应用空白生物基质稀释后测定，不能使用标曲外推

3）定量下限是标曲上的最低浓度点，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度，不是越低越好，在低浓度下可能不成线性，应能满足测定3-5个消除半衰期时样品中的药物浓度，80-120%。4）精密度与准确度。精密度每天一批，一般做3批，选择高中低三个浓度水平，每个浓度水平至少五份。准确度不单独考察，在考察精密度的同时就得到，低点80-120，中高点85-115。低浓度一般选在LLOQ3倍以内，高浓度在标曲最高点80%-90%。5）样品稳定性：室温放置（1-10h）；反复冻融，一般3次，每次至少24h12h12h；长期冰冻。6）提取回收率:应考察高中低三个浓度的提取回收率，结果应当精密和可重现。

质控样品：高中低3个浓度，双质控，每批至少查5%质控样品（但至少6个质控样品）。质控样品测定结果的偏差应小于15%，低浓度点偏差应小于20%，最多允许1/3质控样品超过上限，但不允许出现在同一浓度中。 4、代谢物研究的制备方法

体外方法。1）肝微粒体温孵法2）肝细胞温孵法3）基因重组酶温孵法4）肝组织切片法5）离体肝灌流法6）肠道菌群体外温孵法

体内方法。1）胆汁2）尿液：采集的尿是自然排尿，包括随时尿、晨尿、白天尿、夜间尿及时间尿几种。3）粪便4）血液5）其他：乳汁、肝匀浆等 严方

1、蛋白质组学的定义

定义：意指“一种基因组所表达的全套蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识。

2、蛋白组学的特点