内容发布更新时间 : 2024/12/26 2:47:44星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
繁殖斑马鱼后代流程
1. 配鱼:头一天晚上将鱼配上,每个配种盒里放1条雄鱼,1~2条雌鱼。同品系的鱼自交至
少需要配10对,这样保证至少有5对产卵,以保证后代的基因库。不同品系的鱼(比如与野生型交配)配5对以上,保证至少有3对产卵。 2. 收集胚胎:当天早上收集胚胎,挑去其中异物,再用embryomedia 清洗2-3次,放入培养
箱。 3. 挑选胚胎:胚胎发育4-5小时,移去未受精的卵及死胚。第二天早上观察,若胚胎发育异
常(不是突变体)比率较高(>10%),则丢弃整盘胚胎。正常的胚胎中每盘取10~20枚左右,混成一盘,再分装成若干盘,每盘20~25枚(这样以后每缸鱼里面都有不同亲本的后代,以保证基因库的大小)。以后的四天内每日检查胚胎一次,去掉死胚。 4. 培养鱼苗:第5天的小鱼放入鱼房烧杯中,加入约200ml 鱼缸水(system water), 放在标记为(5~12天)架子上。鱼苗进食有3个阶段:第一阶段草履虫,第二阶段丰年虫+草履虫,第三阶段丰年虫,每一阶段都放在不同的架层上。放进去后头两天观察一下鱼是否正常进食(可从鱼的肚子来观察),并且注意食物是否过多过少。在完全换成丰年虫之前要确认小鱼是否已经能吞食丰年虫(肚子是否变红),确认大部分都能吞食丰年虫之后再放到相应的架层上,否则应相应地增加或缩减第二阶段。经常检查(尤其是刚开始喂食阶段和不同阶段转换的时候一定要检查),用吸管吸除垃圾及死鱼。 5. 转入系统:满20天并且绝大多数小鱼能够吃丰年虫3~5天之后,将小鱼转到鱼缸中。鱼缸上贴上标签,并贴红标签(红标签是提醒阿姨少喂食)。用深蓝色细网孔后背板,确认后背板与鱼缸之间紧密接触,小鱼不会轻易跑到后背板后面。转入系统头两天关闭水流,2~3天之后水流成连续滴状为宜,以防小鱼被冲走。一周之后(此时鱼一个月大),水流进一步增加,但仍要比较小,水流基本垂直落下为宜。去红标签。 6. 分缸:当鱼满1.5个月,视其生长情况可以分缸,分成每缸10条鱼为宜。更换后背板和鱼
缸,使用浅蓝色大网孔后背板。水流调整到与成鱼一样。 7. 鉴定:当鱼2.5~3个月时,视其生长情况,鉴定突变体。更换鱼缸及后背板,使用成鱼鱼
缸后背板。 8. 交配:当鱼长到4个月大时,基本可以用于交配,但如果鱼比较小(正常成鱼应该3~4cm
左右,请参照1年左右的成鱼),说明鱼可能因为营养不良等原因成长较慢,宜再养大一些交配。一代鱼长成至少需要4个月的时间,所以大家涉及到用鱼的实验,应尽早安排。 9. 传代:当鱼满8~10个月时,需要进行传代。传代之前,请咨询一下鱼房管理员蒋逊,大家应尽量把传代时间错开,以免草履虫不够用。 注:养小鱼之前要确定总共要养的小鱼数目,总的原则是要保证有足够的后代(保种的话20条鱼左右就够了),但又不能浪费资源(比如需要20条鱼,结果养了80条)。正常情况下突变体需要养60条左右,这样最后得到48(按80%成活率)条成鱼,其中24~32条是突变体。其他不需要鉴定的鱼(转基因鱼)养30条左右。这样就能保证传代。但如果需要大量用某个品系的鱼,则要计算好需要的起始数量。