内容发布更新时间 : 2024/5/17 15:14:30星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。

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(3)若要对上述初步筛选出的分解尿素的微生物作进一步的鉴定，需在下表培养基配方中添加的物质是____________。若分离得到的是尿素分解菌，则培养基中pH升高使酚红指示剂变为红色，pH升高的原因是____________________。

成分 KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 酚红指示剂 尿素 蒸馏水 含量 1.4 g 2.1 g 0.2 g 0.01 g 1.0 g 1 000 mL 【解析】(1)取土样用的工具和盛土样的信封等在使用前都需要灭菌。因为土壤中不同微生物的数量不同，因此分离不同种类的微生物要采用不同的稀释度。将一定稀释度的样品接种在以尿素为唯一氮源的培养基上，并在适宜的条件下培养。分解尿素的微生物能在该培养基上生长繁殖，而不能利用尿素的微生物则不能生长繁殖。

(2)此种细菌属于需氧型细菌，主要分布在上层培养液中，因此若未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数偏高。

(3)土壤中分解尿素的微生物为异养型生物，表中培养基还缺少充足的碳源，应添加的物质是葡萄糖(作为碳源)，要用于鉴定微生物，还应添加琼脂(固体培养基中的凝固剂)，使培养基呈固态。尿素分解菌合成的脲酶可将尿素分解成氨，使培养基中pH升高，酚红指示剂变为红色。 答案：(1)灭菌 土壤中不同微生物的数量不同 不能利用尿素的微生物 (2)偏高

(3)葡萄糖、琼脂 尿素分解菌合成的脲酶将尿素分解成氨

6.(10分)大肠杆菌是与我们日常生活联系非常密切的细菌，请回答有关检测饮用水中大肠杆菌的问题： (1)检测饮用水中大肠杆菌的含量时，通常将样品进行一系列的梯度稀释，将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，然后记录菌落数量，这种方法称为______________。判断下面所示的4个菌落分布图中，不可能是用该方法得到的是________。

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(2)用上述方法统计样本中菌落数时是否需要设置对照组？________(填“需要”或“不需要”)，其原因是需要判断培养基______________，对于固体培养基应采用的检测方法是将________的培养基在适宜的温度下放置一段时间，观察培养基上是否有菌落产生。

(3)在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________(填“消毒”或“灭菌”)处理；操作者的双手需要进行清洗和________；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使其内蛋白质变性，还能破坏它的________的结构。

(4)检测大肠杆菌实验结束后，使用过的培养基及其培养物必须经过________处理才能丢弃，以防止培养物的扩散。

【解析】(1)D中菌落的分布情况为平板划线法所得。

(2)为判断培养基灭菌是否合格，本实验需要设置对照。要判断固体培养基是否被污染，可将未接种的培养基在适宜的温度下放置一段时间，若发现有菌落产生，则说明培养基已被污染。

(3)消毒是指使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)。灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。对培养基和培养器皿进行灭菌处理，操作者的双手需要进行清洗和用酒精消毒。

(4)为防止培养物的扩散，对于使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理才能丢弃。 答案：(1)稀释涂布平板法 D

(2)需要 是否被杂菌污染(灭菌是否合格) 未接种

(3)灭菌 消毒 DNA (4)灭菌

7.(12分)苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，

①为土壤样品。请据图回答下列问题：

(1)②中培养目的菌株的选择培养基中应加入__________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基

__________(填“影响”或“不影响”)细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用________________法。

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(2)④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于

______________________________；使用__________________________法可以在⑥上获得单菌落。(3)实验过程中如何防止其他微生物的污染？

_________________________________________________________________。

【解析】(1)要从土壤中筛选只能降解利用苯酚的细菌菌株，应在培养基中加入苯酚作为碳源。不同浓度碳源的培养基影响细菌的数量。要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法。

(2)根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长、抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用稀释涂布平板法或平板划线法筛选出单个目的菌落，再进行接种培养即可获得纯目的菌。

(3)实验过程中防止其他微生物污染的方法有培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作等。 答案：(1)苯酚 影响 稀释涂布平板

(2)④的培养基中没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基中加入了苯酚作为碳源 稀释涂布平板法或平板划线

(3)培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程进行无菌操作 【加固训练】

临床实验表明，服用乳酸菌及其制品具有减少人体血清胆固醇含量、降低心脑血管发病率的功效。下面是从酸奶中筛选出高效降低胆固醇的乳酸菌的实验，请回答下列问题：

(1)制备固体培养基(MRS)：在普通的液体培养基中添加碳酸钙和________，加热使其熔化，然后转移到锥形瓶中。经____________处理后，待其冷却至50 ℃左右，在酒精灯火焰附近倒平板。

(2)将少量酸奶制成1∶10稀释液，再将梯度稀释到10的稀释液涂布于添加了碳酸钙的乳酸菌培养基(MRS)平板上，在________(填“有氧”或“无氧”)条件下37 ℃恒温培养72 h。挑取______(填“有”或“无”)溶钙圈(或透明圈)的菌落，用__________法接种在MRS培养基上反复纯化至纯种备用。

(3)在普通的MRS液体培养基中添加适量__________并用超声波振荡乳化20 min，调pH至7.0，然后将纯化后的乳酸菌菌株接种到该培养液中培养，一段时间后用特定显色剂分光光度法离心测定上清液中________的含量，以________________________作为对照，测定菌株降低胆固醇的能力，筛选出目的菌株。

【解析】(1)在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。培养基应使用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。

(2)乳酸菌是厌氧微生物，需在无氧条件下培养。乳酸菌发酵产物为乳酸，乳酸溶解碳酸钙，产生透明圈，所以能产生透明圈的菌落即为乳酸菌菌落，挑取后，用平板划线法接种纯化培养。

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(3)要从酸奶中筛选出高效降低胆固醇的乳酸菌，需在培养基中添加适量的胆固醇，接种培养后测定胆固醇的含量，并与未接种的高胆固醇培养液比较，测定菌株降胆固醇的能力，筛选出目的菌株。 答案：(1)琼脂 高压蒸汽灭菌 (2)无氧 有 平板划线

(3)胆固醇 胆固醇 未接种的该培养液

(2018·廊坊模拟)尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，为探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌(目的菌)。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。

KH2PO4 1.4 g Na2HPO4 2.1 g MgSO4·7H2O 0.2 g 葡萄糖 10 g 尿素 1 g 琼脂 15 g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定溶到1 000 mL，调pH为7.2

(1)培养基中加入尿素的目的是________，从物理形态看，该培养基属于____培养基。“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的__________和_________，为了满足图示锥形瓶中目的菌对氧气的需求，应采用的操作方法是____________。

(2)图中将细菌(非硝化细菌)转到培养基上时，应采用________法接种，获得单个菌落。接种环的灭菌方法是____________。初步筛选出来的菌种，还需要用生化的方法做进一步的鉴定：在此培养基中接种并培养初步筛选的菌种，若pH__________(填“降低”“不变”或“升高”)，则说明该菌种能够分解尿素。 (3)A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。若造成A同学实验结果的原因是培养基被杂菌污染。为了确定该原因，其操作思路是______________________________________________。

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【解析】(1)分析题表培养基配方可知，此培养基是以尿素为唯一氮源的培养基，这样只有能分解尿素的微生物才能生长，不能分解尿素的微生物因缺乏氮源而无法生长，起到了筛选目的菌的作用。从物理形态看，该培养基配方中含有凝固剂琼脂，属于固体培养基。“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的尿素和葡萄糖。为了满足图示锥形瓶中液体培养基中目的菌对氧气的需求，应采用的操作方法是振荡培养(或搅拌)。

(2)将图中的菌液转移到固体培养基上需要使用稀释涂布平板法接种。接种环需要进行灼烧灭菌。尿素分解菌能够将尿素转化为氨而使pH升高，若pH升高，则说明该菌种能够分解尿素。

(3)根据题意可知，确定培养基被杂菌污染需要将A同学的培养基在不加土壤稀释液的情况下培养，设置空白对照。

答案：(1)筛选目的菌 固体 尿素 葡萄糖 振荡培养(或搅拌) (2)稀释涂布平板 灼烧 升高

(3)将A同学的培养基在不加土壤稀释液的情况下培养，设置空白对照

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