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电泳实验报告思考题

篇一：质粒DnA的提取及其琼脂糖凝胶电泳实验报告及思考题

1．实验目的：

（1）通过本次实验学习和掌握碱裂解法提取质粒； （2）通过本次实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DnA的方法和技术；

2．实验材料及用品

（1）实验仪器（apparatus）：

恒温培养箱（constanttemperatureincubator）、恒温摇床（constanttemperatureshakingtable）、高速离心机（highspeedcentrifuge）、漩涡振荡器（Vortexmixer）、超净工作台（bechtop）、高压灭菌锅（Autoclave）、微量加样器（pipettes）、烧杯（beaker）、量筒（graduatedcylinder）、玻璃棒（stirbar）、微波炉（microwave）、天平（panbalance）、电泳梳子（comb）、电泳槽（electrophoresistank）、电泳器（electro-phoresissystem）、紫外灯

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（ultraviolettransilluminator） 3）、材料与试剂（Reagents）： ①溶液I（solutionⅠ）：

50mmol/L葡萄糖；25mmol/L三羟基甲基氨基甲烷（Tris）Tris-hcl（ph8.0）；10mmol/L乙二胺四乙酸（eDTA）ph8.0 溶液I可成批配制，每瓶约100ml，10磅高压蒸气灭菌15分钟，贮存于4℃。

②溶液Ⅱ（solutionⅡ）：新鲜配制，等体积混合 0.2mol/Lnaoh（临用前用10mol/L贮存液现用现稀释）；1%sDs（可用10％贮存液稀释配制）注意：sDs易产生气泡，不要剧烈搅拌。

③溶液III（solutionⅢ，100mL)：加上后混匀会形成絮状沉淀

60mL5mol/LKAc， 11.5mL冰醋酸，

28.5mLh2o（该溶液钾离子浓度为3mol/L，醋酸根离子浓度为5mol/L）

④Te液缓冲液：10mmol/LTris-hcl（ph8.0）；1mmol/LeDTA（ph8.0） ⑤70%乙醇；

⑥平衡酚：氯仿1：1：

将量取25mlTris-hcl（ph8.0）平衡苯酚，加入24ml氯

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仿和1ml异戊醇，充分混合后，移入棕色玻璃瓶中，4℃保存。

⑦Lb培养基： 胰化蛋白胨10g 酵母提取物5g nacl15g ph7.0

⑧琼脂糖（Agarose）；

⑨1liter（升）5×Tbe备用溶液（stocksolution）： 54gtrisbase，27.5g硼酸（boricacid），20ml0.5mol/LeDTA,ph8.0； ⑩6×凝胶加样缓冲液：

0.25%溴酚蓝（bromophenolblue），40%蔗糖（sucroseinwater）；

另外还有的试剂是：胰RnA酶、DnAmarker、硼酸、gelview试剂

（2）实验材料：含有puc19质粒的大肠杆菌等。 3．实验原理： 1）质粒DnA的提取： （1）关于质粒：

质粒是一类存在于几乎所有细菌中染色体之外（细胞质中）呈游离状态的双链、闭环的DnA分子。质粒通常携带有

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