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SHANDONGＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ ＯＦ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ
发酵工艺学实验报告
糖化酶发酵、提取及活力测定实验
学 院： 生 命 科 学 学 院 专业班级： 生 物 工 程 1602
项目组成员： 刘松良、张金中、蔡超、何建雨、周钻
钻
指导教师： 王 丽 娟
2018年6月
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糖化酶发酵、提取及活力测定实验
何健雨 王丽娟
生命科学学院生工1602班
1. 实验目的
(1) 了解黑曲霉生长特性,学习糖化酶发酵工艺； (2) 了解黑曲霉生长特性,学习糖化酶发酵工艺。 (3) 学习并掌握糖化酶活力测定方法 2. 实验原理
葡萄糖淀粉酶( glucoamylase,EC.3.3.13)系统名为淀粉a-1,4-葡聚糖葡萄糖水解酶,俗称糖化酶,是国内酶制剂中产量最大的品种。糖化酶对淀粉分子的作用是从非还原性末端切开a-1,4键,也能切开a-1,3键和a-1,6键,生成葡萄糖。
生产糖化酶常用的菌种是黑曲霉,将活化好的黑曲霉制成孢子悬浮液,转接接到三角瓶直接进行发酵,或转接到三角瓶作为种子,进行一次扩大培养后,再转接到发酵罐进行糖化酶发酵。
黑曲霉糖化酶是一种胞外酶。首先采用过滤法将菌体等杂质除去,继而对滤液进行浓缩,最后用有机溶剂如乙醇将酶沉淀出来,对沉淀物进行干燥,加工成成品。
糖化酶有催化淀粉水解的作用,能从淀粉分子非还原性末端开始,分解a-1,4键,生成葡萄糖。葡萄糖分子中含有的醛基能被次碘酸钠氧化,过量的次碘酸钠钠,酸化后析出碘,再用硫代硫酸钠标准溶液标定,计算酶活力。
酶活力定义:1g固体酶粉(或1mL液体酶),于559CpH4.6的条件下,1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖,即为一个酶活力单位,以U/mL(U/g)表示。 3. 实验材料
优质大麦芽粉、大米粉、酒花；耐高温-α淀粉酶、糖化酶；乳酸（磷酸）；0.025 mol/L碘液；温度计（100℃）、恒温水浴锅、糖度计、布氏漏斗、分析天平、纱布、玻璃仪器。 4. 方法步骤
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待测酶液的制备:
称取酶粉1-2g,精确至0.0002g,先用少量的乙酸缓 冲液溶解,并用玻璃棒捣研,将上请液小心倾入容量瓶 中。沉渣部分再加入少量缓冲液,如此捣研3-4次,最后 全部移入容量瓶中,用缓冲液定容至刻度(估计酶活力
在100-250U/mL范围内),摇摇匀。通过4层纱布过滤滤,滤 液供测定用。
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