内容发布更新时间 : 2025/6/22 22:52:31星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
20~30bp的核苷酸序列，供设计一对引物之用。PCR的模板是一条单链DNA片段，其3’端具有与引物杂交的序列。 ⑤ 耐高温DNA聚合酶
31、耐高温DNA聚合酶的种类、各自的特点 ①Taq DNA聚合酶，来自嗜热古细菌Thermus aquaticus。该菌1967年从温泉中分离，最适生长温度70℃。现市场上销售的是该基因在E.coli细胞中的表达产物。
特征：相对分子质量为94×103，为单分子酶，具较强的5’→3’DNA聚合酶活性和较弱的5’→3’外切酶活性，缺乏3’ → 5’外切酶活性。最适pH9.0，最适反应温度75℃。合成出错几率8.9×10-5～1.1×10-4。 ②Pwo DNA聚合酶
来自喜温性古细菌Pyrococcus woesei。现市场上销售的是该基因在E.coli细胞中的表达产物。
特征：相对分子质量为90×103，具较强的5’→3’DNA聚合酶活性，兼3’→5’外切酶活性。耐热性更高，保真度比TaqDNA聚合酶高10倍。 ③Tth DNA聚合酶
来自喜温性真细菌Thermus thermophilus HB8。具较强的5’→3’DNA聚合酶活性，缺乏3’ → 5’ 外切酶活性。最适pH9.0，最适反应温度75℃。Mg2+存在时，以DNA为模板合成DNA，Mn2+存在时，可以RNA为模板合成cDNA，用于RT-PCR系统。 ④ Vent DNA 聚合酶
来自嗜热高温球菌Thermococcus litoralis 。相对分子质量85×103。100℃时该酶半衰期为1.8hr，具有3’ → 5’ 外切酶校对活性。合成的准确度比用Taq DNA 聚合酶高5 ～ 15倍。
⑤Pfu DNA 聚合酶
来自激烈热球菌Pyrococcus fariosus。保真度较高。（3’→5’外切酶活性）目前错配率最低。
⑥KOD DNA 聚合酶
特征：①具有强力的3’→5’核酸外切酶活性，与Taq DNA聚合酶相比，保真度比后者高50倍左右。②合成速度比Taq DNA聚合酶快2倍，比Pfu DNA聚合酶快6倍。③耐热性比Taq DNA聚合酶好，在100℃、1小时的热处理后仍可保持约70％的活性，故根据需要可以将热变性步骤的温度设定值提得更高，这对处理GC含量高的模板等具有特异性高级结构的样品非常有利。
⑦高保真 DNA 聚合酶
Phusion 高保真DNA聚合酶 (Finnzymes )，Phusion采用一种新的蛋白融合技术，与一种独特的双链DNA结合蛋白融合后，可以和模板更加紧密的结合，触发更为强劲和快速的扩增，它甚至可以用于结合那些最难被结合的模板, 持续扩增能力（processivity，决定最大扩增长度）是Pfu酶的10倍，Taq酶的2倍。 ⑧ 商用混合 DNA 聚合酶 Ex Taq DNA聚合酶
Ex Taq Hot start DNA聚合酶 LA Taq DNA聚合酶
LA Taq Hot start DNA聚合酶
为了提高扩增的保真度或扩增较长DNA片段，将Taq DNA聚合酶的强启动能力和具有3’→5’外切酶活性高温DNA聚合酶的高持续活性和校正功能结合起来，可以达到很好的效果。 32、PCR平台期的概念、出现平台期的原因
平台期：
出现平台期的原因可能有：
①后期循环酶浓度或聚合时间不足； ②引物耗尽； ③dNTP耗尽；
④产物浓度过高，以致dsDNA解链后又迅速退火，不能与引物结合。 33、PCR产物克隆的几种方式
①在PCR产物两端添加限制性酶切位点；②A/T克隆法；③平末端DNA片段的克隆；④长片段DNA的PCR扩增
34、PCR扩增未知片段的几种方式
①反向PCR；②利用接头的PCR；③热不对称交错PCR
35、RACE、DD-PCR、RAPD、AFLP的概念、原理（参见