内容发布更新时间 : 2025/6/15 10:23:20星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
一、过氧化物酶（POD）活性的测定
POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。 测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。
△470 ×VT
POD活性=
0.01×t×Vs×W
式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；
VT ----提取酶液的总体积（ml） t----反应的时间（min）
Vs ----测定时取用酶液体积（ml） W----样品鲜重（g）
二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定
多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。
酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成浆，4℃条件下12000r/min离心15min后上清液即为粗酶液。
PPO活性测定：反应试管中分别加入0.1 mL酶液+3.9 mL磷酸缓冲液+ 1 mL 1m mol／L的邻苯二酚。混匀后于 30℃保温 10 min，迅速加入 2 mL质量分数为20％的三氯乙酸终止反应，立即于525nm下测定其吸光度值，计算酶活。
PPO活性= OD×VT
0.01×t×0.5g×Vs
= OD×VT
0.005
OD——反应时间内吸光值的变化； VT ----提取酶液的总体积（ml） Vs ----测定时取用酶液体积（ml） T———反应时间(min)；
三、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性的测定
参照张志良等(1990)人的方法并稍作改动。
标准曲线的制定，配制浓度0~ 250 μg/ml的IAA溶液，分别在530nm下测定吸光度，并绘制标准曲线。
酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成浆，4℃条件下12000r/min离心20min后上清液即为粗酶液。
IAAO活性测定：量取1ml 酶液+2ml 1mmol/L MnCl2 +1ml 1mmol/L 二氯酚+2ml 1mmol/L IAA+5mL PH=6.0的磷酸缓冲溶液，放入30℃的水浴中30min,对照为2ml 1mol/L的MnCl2+1ml 1mol/L 二氯酚+2ml 1mmol/L IAA+6ml PH=6.0 磷酸缓冲液。将上述溶液吸取2ml，与4ml反应液（0.5mol/L的FeCl31.0ml+35%的过氯酸30ml）混合置于黑暗处，30℃条件下保存30min，最后测定530nm下的吸光度，并计算酶活性。IAAO活性以每mg蛋白质在1h内分解破坏1μgIAA的酶量表示酶活性大小。
（C 1- C 2）×V T
吲哚乙酸氧化酶活性=
W×t×V 1 [μg/ （ g·h ） ]
式中： C 1 ——对照管在标准曲线上查得 IAA, μg ； C 2 ——测定管在标准曲线上查得 IAA, μg ；
V T ——酶液稀释后总体积， mL ；V 1 ——酶液反应时用体积， mL W ——样品重量， g ；t ——酶促时间， h