内容发布更新时间 : 2025/3/29 1:20:07星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
9．答：
(1)非传递性和不被带动转移。对于多数基因克隆操作来说，都不希望载体能够进行自主
传递，也不希望被带动转移。
(2)具有条件致死突变，如温度敏感质粒pJC307(ColEl的衍生质粒)在哺乳动物正常体温
下就丧失复制能力，可防止克隆基因扩散，只存在于限定的宿主细胞中。(3)一般情况下不希望与宿主染色体发生重组，因为重组后有可能给宿主带来突变。 (4)有较小的宿主范围。 10． 答：
(1)菌体DNA没有容载能力，因为噬菌体的头部对DNA包装的量是有限制的，不能大于
基因组的105％，所以要将?噬菌体改造成载体，必须削减分子量。
(2)野生型的?DNA对于一些常用的酶都有多个识别和切割位点，不便于克隆。 (3)没有可供选择的标记。
(4)野生型的?噬菌体具有感染性，因此不够安全。 11．答：
这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在?载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌?—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的?载体转入lac的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—?—D—半乳糖苷(X-gal)平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac(或lac基因部分被取代)后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚—?—D—半乳糖苷 (X-gal)平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。 12．答：
?—半乳糖苷酶的N末端是非必需的，，可以进行修饰，并不影响酶的活性或?肽的互 补性。如果插入的外源DNA引起?肽的可读框的改变，或者插入片段在正确的可读框中含有终止密码的话，就会形成白色噬菌斑。如果插入DNA的碱基数正好是3的倍数，或者插入的DNA中不含有终止密码的话，仍然会形成蓝色噬菌斑。这种插入物的长度可达几百个碱基对。M13载体的这种性质可以用来检测和选择产生新的终止密码或改变可读框，即移码突变。 13．答
M13克隆系统具有很多优点：
(1)克隆的片段大：M13噬菌体的DNA在包装时不受体积的限制，所以容载能力大，有
报道，有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA长6—7倍的DNA(插人片段可达40kb)。
(2)可直接产生单链DNA，这对于DNA测序、DNA诱变、制备特异的单链DNA探针都
是十分有用的。
(3)单链DNA和双链DNA都可以转染宿主，并可根据人工加上的选择标记进行筛选。 M13克隆系列的不足：
(1)较大的外源片段插入后，在扩增过程中往往不够稳定，一般说，克隆的片段越大，发
生丢失的机率越大。
(2)单链载体分子感染的细胞中，往往是单链和双链混杂，分离双链比较麻烦。 14．答：
主要特点有：
(1)具有质粒复制子，进入寄主细胞后能够像质粒一样进行复制，并且能够被氯霉素扩增。 (2)具有质粒载体的抗生素抗性基因的选择标记。 (3)具有?噬菌体的包装和转导特性。
(4)容载能力大。克隆的最大片段在45kb，最小片段为19kb。
(5)简化了筛选。如果载体的分子量在5kb的话，得到的转导子几乎排除由载体自连的可
能性，因为要被成功包装，至少要7个分子的载体自连，尽管如此，也是不能被包装的，因为COS位点太多了。
黏粒载体也有如下不足：(1)如果两个黏粒之间有同源序列，可能会发生重组，结果会使
被克隆的片段重排或丢失。
(2)含不同重组DNA片段的菌落生长速度不同，会造成同一个子板上菌落大小不一。另
外由于不同大小的插入片段对宿主细胞的作用不同，会造成文库扩增量的比例失调。 (3)包装过程复杂，包装