内容发布更新时间 : 2025/6/24 10:05:39星期一 下面是文章的全部内容请认真阅读。
一、实验目的
1、 学会使用UV-2550型紫外-可见光分光光度计。 2、 掌握紫外—可见分光光度计的定量分析方法。
3、 学会利用紫外可见光谱技术进行有机化合物特征和定量分析
的方法。
二、实验原理
基于物质对200-800nm光谱区辐射的吸收特性建立起来的分析测定方法称为紫外—可见吸收光谱法或紫外—可见分光光度法。紫外—可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。紫外—可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即：
其中A是吸光度，I、I0分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，ε为摩尔吸光系数，b为样品厚度，c为浓度。
紫外吸收光谱是由于分子中的电子跃迁产生的。按分子轨道理论，在有机化合物分子中这种吸收光谱取决于分子中成键电子的种类、电子分布情况，根据其性质不同可分为3种电子：（1）形成单键的σ电子 ；（2）形成不饱和键的π电子 ；（3）氧、氮、硫、卤素等杂原子上的未成键的n电子 。
图1. 基团中的σ，π，n成键电子
当它们吸收一定能量ΔE后，将跃迁到较高的能级，占据反键轨道。分子内部结构与这种特定的跃迁是有着密切关系的，使得分子轨道分为成键σ轨道、反键σ*轨道、成键π轨道、反键 π* 轨道和n轨道，其能量由低到高的顺序为：σ<π
图2.分子轨道中的能量跃迁示意图
仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。
三、仪器与溶液准备
1、 UV-2550型紫外—可见分光光度计 2、 1cm石英比色皿一套 3、 UVprobe电脑软件
4、 配置好的10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL以及未知浓度的甲基
紫溶液，甲基红溶液 5、 仪器的基本构成：
紫外可见分光光度计的基本结构如下：
光源→单色器→吸收池→检测器→信息处理与显示系统 四、实验步骤 样品 1、打开电源，开启紫外—可见分光光度计上的开关，打开电脑上的UVprobe软件，让其自检，约5min后，对仪器相关参数设置。设置波长范围为400-200nm，高速检测，间隔为0.5nm。 2、空白对比实验。取一定量的蒸馏水装进1cm石英比色皿至2/3，在Win-UV 主显示窗口下，单击所选图标“基线”以扫描蒸馏水的测定吸收曲线。 3、取一定浓度的的水杨酸溶液，装进石英比色皿中放到紫外—可见分光光度计中，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据和吸光度。得到其标准图谱。 4、同样的方法测定一定浓度的水杨醛溶液，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据和吸光度。得到其标准图谱。 5、同样的方法测定未知溶液，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据和吸光度。得到其图谱。 6、数据处理和分析。 7、结果与讨论。 五、实验数据处理
2
1．实验数据记录
将实验数据用excel作图可得到水杨酸和水杨醛的紫外可见分光波谱图，分别如图3和图4.
图3 实验1水杨酸的紫外可见分光波谱图
图4 实验2 水杨醛的紫外可见分光波谱图
图5 实验3 未知溶液的紫外可见分光波谱图
3
2.实验数据处理 由实验3所得的可见分光波谱图可知，该溶液的最大吸收波长为245nm，对比图3、图4，该溶液为水杨酸溶液。, 将波长为580nm时不同浓度的甲基紫溶液的吸光度列出如表1。 表1，所测溶液最大吸光度数据 溶液名称 溶液浓度（mg/