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高效液相色谱常见问题与解?/p>

 

1 

何谓反相柱、正相柱?/p>

 

答:

“

反相

”

?/p>

“

正相

”

的概念是液相色谱法早期提出的概念,当时键合相?/p>

谱柱尚未出现,固定相被涂覆在载体表面,极易流失,为此科学家对流动相使用给出了合理的建议:流动

相极性与固定液极性应具有较大差别,以减少固定液流失。固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为

反相色谱法,固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为?/p>

流,但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义?/p>

 

由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性,同时还取决于流动

相极性?/p>

C18(

硅胶键合十八烷基硅烷

)

?/p>

C8(

硅胶键合辛基硅烷

)

?/p>

PH(

硅胶键合苯基硅烷

)

等色谱柱,由于固

定相极性极低,

比目前已知的任何流动相的极性都要低?/p>

因而是标准的反相柱?/p>

Silica(

硅胶

)

?/p>

NH2(

硅胶?/p>

合氨丙基硅烷

)

具有较高的极性,主要用于分离带有极性基团的化合物,所用流动相的极性通常低于这些?/p>

定相?/p>

因而是标准的正相柱?/p>

CN(

硅胶键合腈丙?/p>

)

的极性适中,当流动相极性超?/p>

CN

时,

它属于反相柱?/p>

反之则是正相柱?/p>

 

2 

色谱柱规格对分析结果会产生何种影响?

 

答:色谱柱内径决定载样量,载样量与内径的平方成正比;色谱柱长度与塔板数成正比,与柱压成正比;

粒径影响涡流扩散相,粒径越小涡流扩散相越小,柱效越高,粒径与柱效近似成反比;粒径越小,压力也

越大,压力与粒径的平方成反比。填料孔径对分析对象的分子量有限制,当孔径为分析物尺寸的

5

倍以?/p>

时,分析物才能顺利通过孔隙,孔径处?/p>

60~120 Å

的色谱柱适用于相对分子量小于

10000

的分?/p>

物,孔径?/p>

300 Å

的色谱柱可以满足分子量处?/p>

10000

以上的大分子化合物分析?/p>

 

3 

液相色谱分析中如何才能提高分离度?/p>

 

答:下式为分离度计算公式

 

 

N

:柱?/p>

(Efficiency)

反映色谱柱性能,柱效越高,分离度越好。在其他条件恒定的情况下,塔板数增加一

倍,分离度仅提高

40%

。操作中,可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度:其一,使用长柱或?/p>

柱串联,但也会使分离时间大大延长;其二,使用细粒径填料的色谱柱,但这需要耐更高压力的液相色谱

系统。相比之下后者更为可取?/p>

 

α

?/p>

选择?/p>

(selectivity)

是指色谱?/p>

-

流动相体系分离两个化合物的能力?/p>

选择性主要与固定相?/p>

流动

相组成以及柱温等因素有关,与保留值也密切相关,其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反?/p>

模式为例,反相柱

(

包括

C18

?/p>

C8

?/p>

PH

?/p>

)

是以分配作用对化合物进行保留的,不同化合物的分离是基?/p>

它们在键合相与流动相中分配系数的差异?/p>

如果两种化合物的水溶性?/p>

在烷?/p>

-

水体系的分配系数等方面存

在明显差异,那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离?/p>

PH

柱对具有苯环的化合物具有特殊保留?/p>

正相模式下,硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用,对化合物的基?/p>

具有选择性,常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面,降低流动相的洗脱强度通常可以

增大分离度;而有机溶剂类型也会影响分离,比如反相条件下,乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异,这

种差异需要在实践中摸索,但无论如何,多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能?/p>

 

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高效液相色谱常见问题与解?/p>

 

1 

何谓反相柱、正相柱?/p>

 

答:

“

反相

”

?/p>

“

正相

”

的概念是液相色谱法早期提出的概念,当时键合相?/p>

谱柱尚未出现,固定相被涂覆在载体表面,极易流失,为此科学家对流动相使用给出了合理的建议:流动

相极性与固定液极性应具有较大差别,以减少固定液流失。固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为

反相色谱法,固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为?/p>

流,但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义?/p>

 

由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性,同时还取决于流动

相极性?/p>

C18(

硅胶键合十八烷基硅烷

)

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C8(

硅胶键合辛基硅烷

)

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PH(

硅胶键合苯基硅烷

)

等色谱柱,由于固

定相极性极低,

比目前已知的任何流动相的极性都要低?/p>

因而是标准的反相柱?/p>

Silica(

硅胶

)

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NH2(

硅胶?/p>

合氨丙基硅烷

)

具有较高的极性,主要用于分离带有极性基团的化合物,所用流动相的极性通常低于这些?/p>

定相?/p>

因而是标准的正相柱?/p>

CN(

硅胶键合腈丙?/p>

)

的极性适中,当流动相极性超?/p>

CN

时,

它属于反相柱?/p>

反之则是正相柱?/p>

 

2 

色谱柱规格对分析结果会产生何种影响?

 

答:色谱柱内径决定载样量,载样量与内径的平方成正比;色谱柱长度与塔板数成正比,与柱压成正比;

粒径影响涡流扩散相,粒径越小涡流扩散相越小,柱效越高,粒径与柱效近似成反比;粒径越小,压力也

越大,压力与粒径的平方成反比。填料孔径对分析对象的分子量有限制,当孔径为分析物尺寸的

5

倍以?/p>

时,分析物才能顺利通过孔隙,孔径处?/p>

60~120 Å

的色谱柱适用于相对分子量小于

10000

的分?/p>

物,孔径?/p>

300 Å

的色谱柱可以满足分子量处?/p>

10000

以上的大分子化合物分析?/p>

 

3 

液相色谱分析中如何才能提高分离度?/p>

 

答:下式为分离度计算公式

 

 

N

:柱?/p>

(Efficiency)

反映色谱柱性能,柱效越高,分离度越好。在其他条件恒定的情况下,塔板数增加一

倍,分离度仅提高

40%

。操作中,可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度:其一,使用长柱或?/p>

柱串联,但也会使分离时间大大延长;其二,使用细粒径填料的色谱柱,但这需要耐更高压力的液相色谱

系统。相比之下后者更为可取?/p>

 

α

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选择?/p>

(selectivity)

是指色谱?/p>

-

流动相体系分离两个化合物的能力?/p>

选择性主要与固定相?/p>

流动

相组成以及柱温等因素有关,与保留值也密切相关,其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反?/p>

模式为例,反相柱

(

包括

C18

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C8

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)

是以分配作用对化合物进行保留的,不同化合物的分离是基?/p>

它们在键合相与流动相中分配系数的差异?/p>

如果两种化合物的水溶性?/p>

在烷?/p>

-

水体系的分配系数等方面存

在明显差异,那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离?/p>

PH

柱对具有苯环的化合物具有特殊保留?/p>

正相模式下,硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用,对化合物的基?/p>

具有选择性,常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面,降低流动相的洗脱强度通常可以

增大分离度;而有机溶剂类型也会影响分离,比如反相条件下,乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异,这

种差异需要在实践中摸索,但无论如何,多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能?/p>

 

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高效液相色谱常见问题与解?/p>

 

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何谓反相柱、正相柱?/p>

 

答:

“

反相

”

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“

正相

”

的概念是液相色谱法早期提出的概念,当时键合相?/p>

谱柱尚未出现,固定相被涂覆在载体表面,极易流失,为此科学家对流动相使用给出了合理的建议:流动

相极性与固定液极性应具有较大差别,以减少固定液流失。固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为

反相色谱法,固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为?/p>

流,但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义?/p>

 

由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性,同时还取决于流动

相极性?/p>

C18(

硅胶键合十八烷基硅烷

)

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C8(

硅胶键合辛基硅烷

)

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PH(

硅胶键合苯基硅烷

)

等色谱柱,由于固

定相极性极低,

比目前已知的任何流动相的极性都要低?/p>

因而是标准的反相柱?/p>

Silica(

硅胶

)

?/p>

NH2(

硅胶?/p>

合氨丙基硅烷

)

具有较高的极性,主要用于分离带有极性基团的化合物,所用流动相的极性通常低于这些?/p>

定相?/p>

因而是标准的正相柱?/p>

CN(

硅胶键合腈丙?/p>

)

的极性适中,当流动相极性超?/p>

CN

时,

它属于反相柱?/p>

反之则是正相柱?/p>

 

2 

色谱柱规格对分析结果会产生何种影响?

 

答:色谱柱内径决定载样量,载样量与内径的平方成正比;色谱柱长度与塔板数成正比,与柱压成正比;

粒径影响涡流扩散相,粒径越小涡流扩散相越小,柱效越高,粒径与柱效近似成反比;粒径越小,压力也

越大,压力与粒径的平方成反比。填料孔径对分析对象的分子量有限制,当孔径为分析物尺寸的

5

倍以?/p>

时,分析物才能顺利通过孔隙,孔径处?/p>

60~120 Å

的色谱柱适用于相对分子量小于

10000

的分?/p>

物,孔径?/p>

300 Å

的色谱柱可以满足分子量处?/p>

10000

以上的大分子化合物分析?/p>

 

3 

液相色谱分析中如何才能提高分离度?/p>

 

答:下式为分离度计算公式

 

 

N

:柱?/p>

(Efficiency)

反映色谱柱性能,柱效越高,分离度越好。在其他条件恒定的情况下,塔板数增加一

倍,分离度仅提高

40%

。操作中,可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度:其一,使用长柱或?/p>

柱串联,但也会使分离时间大大延长;其二,使用细粒径填料的色谱柱,但这需要耐更高压力的液相色谱

系统。相比之下后者更为可取?/p>

 

α

?/p>

选择?/p>

(selectivity)

是指色谱?/p>

-

流动相体系分离两个化合物的能力?/p>

选择性主要与固定相?/p>

流动

相组成以及柱温等因素有关,与保留值也密切相关,其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反?/p>

模式为例,反相柱

(

包括

C18

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C8

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是以分配作用对化合物进行保留的,不同化合物的分离是基?/p>

它们在键合相与流动相中分配系数的差异?/p>

如果两种化合物的水溶性?/p>

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-

水体系的分配系数等方面存

在明显差异,那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离?/p>

PH

柱对具有苯环的化合物具有特殊保留?/p>

正相模式下,硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用,对化合物的基?/p>

具有选择性,常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面,降低流动相的洗脱强度通常可以

增大分离度;而有机溶剂类型也会影响分离,比如反相条件下,乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异,这

种差异需要在实践中摸索,但无论如何,多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能?/p>

 

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色谱柱常见问?- 百度文库
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高效液相色谱常见问题与解?/p>

 

1 

何谓反相柱、正相柱?/p>

 

答:

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反相

”

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正相

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的概念是液相色谱法早期提出的概念,当时键合相?/p>

谱柱尚未出现,固定相被涂覆在载体表面,极易流失,为此科学家对流动相使用给出了合理的建议:流动

相极性与固定液极性应具有较大差别,以减少固定液流失。固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为

反相色谱法,固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。尽管目前键合相色谱柱已成为?/p>

流,但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义?/p>

 

由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性,同时还取决于流动

相极性?/p>

C18(

硅胶键合十八烷基硅烷

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?/p>

C8(

硅胶键合辛基硅烷

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PH(

硅胶键合苯基硅烷

)

等色谱柱,由于固

定相极性极低,

比目前已知的任何流动相的极性都要低?/p>

因而是标准的反相柱?/p>

Silica(

硅胶

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NH2(

硅胶?/p>

合氨丙基硅烷

)

具有较高的极性,主要用于分离带有极性基团的化合物,所用流动相的极性通常低于这些?/p>

定相?/p>

因而是标准的正相柱?/p>

CN(

硅胶键合腈丙?/p>

)

的极性适中,当流动相极性超?/p>

CN

时,

它属于反相柱?/p>

反之则是正相柱?/p>

 

2 

色谱柱规格对分析结果会产生何种影响?

 

答:色谱柱内径决定载样量,载样量与内径的平方成正比;色谱柱长度与塔板数成正比,与柱压成正比;

粒径影响涡流扩散相,粒径越小涡流扩散相越小,柱效越高,粒径与柱效近似成反比;粒径越小,压力也

越大,压力与粒径的平方成反比。填料孔径对分析对象的分子量有限制,当孔径为分析物尺寸的

5

倍以?/p>

时,分析物才能顺利通过孔隙,孔径处?/p>

60~120 Å

的色谱柱适用于相对分子量小于

10000

的分?/p>

物,孔径?/p>

300 Å

的色谱柱可以满足分子量处?/p>

10000

以上的大分子化合物分析?/p>

 

3 

液相色谱分析中如何才能提高分离度?/p>

 

答:下式为分离度计算公式

 

 

N

:柱?/p>

(Efficiency)

反映色谱柱性能,柱效越高,分离度越好。在其他条件恒定的情况下,塔板数增加一

倍,分离度仅提高

40%

。操作中,可通过下面两种方式增加塔板数进而提高分离度:其一,使用长柱或?/p>

柱串联,但也会使分离时间大大延长;其二,使用细粒径填料的色谱柱,但这需要耐更高压力的液相色谱

系统。相比之下后者更为可取?/p>

 

α

?/p>

选择?/p>

(selectivity)

是指色谱?/p>

-

流动相体系分离两个化合物的能力?/p>

选择性主要与固定相?/p>

流动

相组成以及柱温等因素有关,与保留值也密切相关,其中固定相和流动相组成影响较大。以最常见的反?/p>

模式为例,反相柱

(

包括

C18

?/p>

C8

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PH

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是以分配作用对化合物进行保留的,不同化合物的分离是基?/p>

它们在键合相与流动相中分配系数的差异?/p>

如果两种化合物的水溶性?/p>

在烷?/p>

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水体系的分配系数等方面存

在明显差异,那么这些化合物通常是能够利用反相柱达到分离?/p>

PH

柱对具有苯环的化合物具有特殊保留?/p>

正相模式下,硅胶柱、胺基柱、氰基柱与带有极性基团的化合物之间存在极性相互作用,对化合物的基?/p>

具有选择性,常常用于结构类似物、异构体化合物的分离。流动相方面,降低流动相的洗脱强度通常可以

增大分离度;而有机溶剂类型也会影响分离,比如反相条件下,乙腈和甲醇的选择性就存在很大差异,这

种差异需要在实践中摸索,但无论如何,多种溶剂类型带给我们更多的实现分离的可能?/p>

 



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