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叶绿?/p>

a,b

含量测定

 

[实验目的]

熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿?/p>

a

?/p>

b

的方法及其计算?/p>

 

[实验原理]

在叶绿素

a

?/p>

b

的吸收光谱曲线中,红波波长范围内,叶绿素

a

的最大吸收峰?/p>

663nm

,叶绿素

b

的最大吸

收峰?/p>

645nm

。吸收曲线彼此又有重叠?/p>

 

根据

Lambert

?/p>

Beer

定律,最大吸收峰不同的两个组分的混合液,它们的浓?/p>

C

与光密度

OD

之间有如下关系:

 

OD

1

?/p>

Ca

·

ka

1

+Cb

·

kb

1 

 

 

 

 

 

 

 

(1) 

OD

2

?/p>

Ca

·

ka

2

+Cb

·

kb

2 

 

 

 

 

 

 

 

(2) 

Ca

为组?/p>

a

的浓度(

g/L

?/p>

  Cb

为组?/p>

b

的浓度(

g/L

?/p>

 

OD

1

为在波长

λ

1

(即组分

a

的最大吸收峰波长)时,混合液的光密度

OD

值?/p>

 

OD

2

为在波长

λ

2

(即组分

b

的最大吸收缝波长)时,混合液的光密度

OD

?/p>

?/p>

 

ka

1

?/p>

kb

1

?/p>

ka

2

?/p>

kb

2

分别为组?/p>

a

?/p>

b

的比吸收系数,即组分

a

?/p>

b

)的浓度为(

1g/L

)时,其在相应波?/p>

?/p>

λ

1

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λ

2

?/p>

?/p>

的光密度

OD

值?/p>

 

叶绿?/p>

A

?/p>

B

?/p>

80%

丙酮溶液,当浓度?/p>

1

时,比吸收系?/p>

K

值如下表?/p>

 

波长

/nm 

叶绿?/p>

a 

叶绿?/p>

b 

663 

82.04 

9.27 

645 

16.75 

45.60 

将表中数值代入上式(

1

?/p>

?/p>

?/p>

2

)并整理的:

 

Ca=0.0127OD

663

-0.00269OD

645

 

Cb=0.0229OD

645

-0.00468OD

663

 

若把

Ca

?/p>

Cb

的浓度单位从原来?/p>

g/L

改为

mg/L

,则上式可改写为下列形式?/p>

 

Ca=12.7OD

663

-2.69OD

645 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(3) 

Cb=22.9OD

645

-4.68OD

663 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(4) 

Ct=Ca+Cb=8.02OD

663

+20.21OD

645 

 

 

 

(5) 

Ct

为叶绿素总浓度,单位?/p>

g/L

?/p>

 

利用?/p>

3

?/p>

?/p>

?/p>

4

?/p>

?/p>

?/p>

5

)式即可计算出叶绿素

A

?/p>

B

及总叶绿素的浓度(

g/L

?/p>

?/p>

 

[器材与试剂?/p>

 

1.

 

实验仪器:高级型分光光度计,离心机,台天平,剪刀,研钵,漏斗,移液管

 

2.

 

实验试剂:丙酮,碳酸?/p>

 

3.

 

实验材料:植物叶?/p>

 

[实验步骤]

 

1.

色素的提取:

取新鲜叶片,

剪去粗大的叶脉并剪成碎块?/p>

称取

0.5G

放入研钵中加纯丙?/p>

5ML

?/p>

少许碳酸钙和石英砂,

研磨成匀浆,再加

80%

丙酮

5ML

,将匀浆转入离心管,并用适量

80%

丙酮洗涤研钵,一并转入离心管,离心后弃沉淀,上?/p>

液用

80%

丙酮定容?/p>

20ML

?/p>

 

2.

测定光密度:取上述色素提取液

1ml

,加

80%

丙酮

4ml

稀释和转入比色杯中,以

80%

丙酮为对照,分别测定

663nm

?/p>

645nm

处的光密度值?/p>

 

3.

按公式分别计算色素提取液中叶绿素

A

?/p>

B

及叶绿素总浓度。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量?/p>

 

[注意事项]

 

1.

 

由于植物子叶中含有水分,故先用纯丙酮进行提取,以色素提取液中丙酮的最终浓度近?/p>

80%

?/p>

 

2.

 

由于叶绿?/p>

A

?/p>

B

的吸收峰很陡,仪器波长稍有偏差,就会使结果产生很大的误差,因此最好能用波长较正确的高

级型分光光度计?/p>

 

[实验作业]

 

1.

 

试比较阴生植物和阳生植物的叶绿素

A

和叶绿素

B

的比值有无不同?/p>

 

2.

 

分光光度法和比色法有何不同?

 

3.

 

叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

在红光区和蓝光区都有最大吸收峰?/p>

能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

的定量分析,为什么?

 

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叶绿?/p>

a,b

含量测定

 

[实验目的]

熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿?/p>

a

?/p>

b

的方法及其计算?/p>

 

[实验原理]

在叶绿素

a

?/p>

b

的吸收光谱曲线中,红波波长范围内,叶绿素

a

的最大吸收峰?/p>

663nm

,叶绿素

b

的最大吸

收峰?/p>

645nm

。吸收曲线彼此又有重叠?/p>

 

根据

Lambert

?/p>

Beer

定律,最大吸收峰不同的两个组分的混合液,它们的浓?/p>

C

与光密度

OD

之间有如下关系:

 

OD

1

?/p>

Ca

·

ka

1

+Cb

·

kb

1 

 

 

 

 

 

 

 

(1) 

OD

2

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Ca

·

ka

2

+Cb

·

kb

2 

 

 

 

 

 

 

 

(2) 

Ca

为组?/p>

a

的浓度(

g/L

?/p>

  Cb

为组?/p>

b

的浓度(

g/L

?/p>

 

OD

1

为在波长

λ

1

(即组分

a

的最大吸收峰波长)时,混合液的光密度

OD

值?/p>

 

OD

2

为在波长

λ

2

(即组分

b

的最大吸收缝波长)时,混合液的光密度

OD

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ka

1

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kb

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ka

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kb

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分别为组?/p>

a

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b

的比吸收系数,即组分

a

?/p>

b

)的浓度为(

1g/L

)时,其在相应波?/p>

?/p>

λ

1

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λ

2

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的光密度

OD

值?/p>

 

叶绿?/p>

A

?/p>

B

?/p>

80%

丙酮溶液,当浓度?/p>

1

时,比吸收系?/p>

K

值如下表?/p>

 

波长

/nm 

叶绿?/p>

a 

叶绿?/p>

b 

663 

82.04 

9.27 

645 

16.75 

45.60 

将表中数值代入上式(

1

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?/p>

?/p>

2

)并整理的:

 

Ca=0.0127OD

663

-0.00269OD

645

 

Cb=0.0229OD

645

-0.00468OD

663

 

若把

Ca

?/p>

Cb

的浓度单位从原来?/p>

g/L

改为

mg/L

,则上式可改写为下列形式?/p>

 

Ca=12.7OD

663

-2.69OD

645 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(3) 

Cb=22.9OD

645

-4.68OD

663 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(4) 

Ct=Ca+Cb=8.02OD

663

+20.21OD

645 

 

 

 

(5) 

Ct

为叶绿素总浓度,单位?/p>

g/L

?/p>

 

利用?/p>

3

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4

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5

)式即可计算出叶绿素

A

?/p>

B

及总叶绿素的浓度(

g/L

?/p>

?/p>

 

[器材与试剂?/p>

 

1.

 

实验仪器:高级型分光光度计,离心机,台天平,剪刀,研钵,漏斗,移液管

 

2.

 

实验试剂:丙酮,碳酸?/p>

 

3.

 

实验材料:植物叶?/p>

 

[实验步骤]

 

1.

色素的提取:

取新鲜叶片,

剪去粗大的叶脉并剪成碎块?/p>

称取

0.5G

放入研钵中加纯丙?/p>

5ML

?/p>

少许碳酸钙和石英砂,

研磨成匀浆,再加

80%

丙酮

5ML

,将匀浆转入离心管,并用适量

80%

丙酮洗涤研钵,一并转入离心管,离心后弃沉淀,上?/p>

液用

80%

丙酮定容?/p>

20ML

?/p>

 

2.

测定光密度:取上述色素提取液

1ml

,加

80%

丙酮

4ml

稀释和转入比色杯中,以

80%

丙酮为对照,分别测定

663nm

?/p>

645nm

处的光密度值?/p>

 

3.

按公式分别计算色素提取液中叶绿素

A

?/p>

B

及叶绿素总浓度。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量?/p>

 

[注意事项]

 

1.

 

由于植物子叶中含有水分,故先用纯丙酮进行提取,以色素提取液中丙酮的最终浓度近?/p>

80%

?/p>

 

2.

 

由于叶绿?/p>

A

?/p>

B

的吸收峰很陡,仪器波长稍有偏差,就会使结果产生很大的误差,因此最好能用波长较正确的高

级型分光光度计?/p>

 

[实验作业]

 

1.

 

试比较阴生植物和阳生植物的叶绿素

A

和叶绿素

B

的比值有无不同?/p>

 

2.

 

分光光度法和比色法有何不同?

 

3.

 

叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

在红光区和蓝光区都有最大吸收峰?/p>

能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

的定量分析,为什么?

 

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叶绿?/p>

a,b

含量测定

 

[实验目的]

熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿?/p>

a

?/p>

b

的方法及其计算?/p>

 

[实验原理]

在叶绿素

a

?/p>

b

的吸收光谱曲线中,红波波长范围内,叶绿素

a

的最大吸收峰?/p>

663nm

,叶绿素

b

的最大吸

收峰?/p>

645nm

。吸收曲线彼此又有重叠?/p>

 

根据

Lambert

?/p>

Beer

定律,最大吸收峰不同的两个组分的混合液,它们的浓?/p>

C

与光密度

OD

之间有如下关系:

 

OD

1

?/p>

Ca

·

ka

1

+Cb

·

kb

1 

 

 

 

 

 

 

 

(1) 

OD

2

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Ca

·

ka

2

+Cb

·

kb

2 

 

 

 

 

 

 

 

(2) 

Ca

为组?/p>

a

的浓度(

g/L

?/p>

  Cb

为组?/p>

b

的浓度(

g/L

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OD

1

为在波长

λ

1

(即组分

a

的最大吸收峰波长)时,混合液的光密度

OD

值?/p>

 

OD

2

为在波长

λ

2

(即组分

b

的最大吸收缝波长)时,混合液的光密度

OD

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ka

1

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kb

1

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ka

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kb

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分别为组?/p>

a

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b

的比吸收系数,即组分

a

?/p>

b

)的浓度为(

1g/L

)时,其在相应波?/p>

?/p>

λ

1

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λ

2

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的光密度

OD

值?/p>

 

叶绿?/p>

A

?/p>

B

?/p>

80%

丙酮溶液,当浓度?/p>

1

时,比吸收系?/p>

K

值如下表?/p>

 

波长

/nm 

叶绿?/p>

a 

叶绿?/p>

b 

663 

82.04 

9.27 

645 

16.75 

45.60 

将表中数值代入上式(

1

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?/p>

2

)并整理的:

 

Ca=0.0127OD

663

-0.00269OD

645

 

Cb=0.0229OD

645

-0.00468OD

663

 

若把

Ca

?/p>

Cb

的浓度单位从原来?/p>

g/L

改为

mg/L

,则上式可改写为下列形式?/p>

 

Ca=12.7OD

663

-2.69OD

645 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(3) 

Cb=22.9OD

645

-4.68OD

663 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(4) 

Ct=Ca+Cb=8.02OD

663

+20.21OD

645 

 

 

 

(5) 

Ct

为叶绿素总浓度,单位?/p>

g/L

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利用?/p>

3

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4

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5

)式即可计算出叶绿素

A

?/p>

B

及总叶绿素的浓度(

g/L

?/p>

?/p>

 

[器材与试剂?/p>

 

1.

 

实验仪器:高级型分光光度计,离心机,台天平,剪刀,研钵,漏斗,移液管

 

2.

 

实验试剂:丙酮,碳酸?/p>

 

3.

 

实验材料:植物叶?/p>

 

[实验步骤]

 

1.

色素的提取:

取新鲜叶片,

剪去粗大的叶脉并剪成碎块?/p>

称取

0.5G

放入研钵中加纯丙?/p>

5ML

?/p>

少许碳酸钙和石英砂,

研磨成匀浆,再加

80%

丙酮

5ML

,将匀浆转入离心管,并用适量

80%

丙酮洗涤研钵,一并转入离心管,离心后弃沉淀,上?/p>

液用

80%

丙酮定容?/p>

20ML

?/p>

 

2.

测定光密度:取上述色素提取液

1ml

,加

80%

丙酮

4ml

稀释和转入比色杯中,以

80%

丙酮为对照,分别测定

663nm

?/p>

645nm

处的光密度值?/p>

 

3.

按公式分别计算色素提取液中叶绿素

A

?/p>

B

及叶绿素总浓度。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量?/p>

 

[注意事项]

 

1.

 

由于植物子叶中含有水分,故先用纯丙酮进行提取,以色素提取液中丙酮的最终浓度近?/p>

80%

?/p>

 

2.

 

由于叶绿?/p>

A

?/p>

B

的吸收峰很陡,仪器波长稍有偏差,就会使结果产生很大的误差,因此最好能用波长较正确的高

级型分光光度计?/p>

 

[实验作业]

 

1.

 

试比较阴生植物和阳生植物的叶绿素

A

和叶绿素

B

的比值有无不同?/p>

 

2.

 

分光光度法和比色法有何不同?

 

3.

 

叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

在红光区和蓝光区都有最大吸收峰?/p>

能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

的定量分析,为什么?

 

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植物生理学实?叶绿素a b测定 - 百度文库
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叶绿?/p>

a,b

含量测定

 

[实验目的]

熟悉在未经分离的叶绿素溶液中测定叶绿?/p>

a

?/p>

b

的方法及其计算?/p>

 

[实验原理]

在叶绿素

a

?/p>

b

的吸收光谱曲线中,红波波长范围内,叶绿素

a

的最大吸收峰?/p>

663nm

,叶绿素

b

的最大吸

收峰?/p>

645nm

。吸收曲线彼此又有重叠?/p>

 

根据

Lambert

?/p>

Beer

定律,最大吸收峰不同的两个组分的混合液,它们的浓?/p>

C

与光密度

OD

之间有如下关系:

 

OD

1

?/p>

Ca

·

ka

1

+Cb

·

kb

1 

 

 

 

 

 

 

 

(1) 

OD

2

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Ca

·

ka

2

+Cb

·

kb

2 

 

 

 

 

 

 

 

(2) 

Ca

为组?/p>

a

的浓度(

g/L

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  Cb

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b

的浓度(

g/L

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OD

1

为在波长

λ

1

(即组分

a

的最大吸收峰波长)时,混合液的光密度

OD

值?/p>

 

OD

2

为在波长

λ

2

(即组分

b

的最大吸收缝波长)时,混合液的光密度

OD

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ka

1

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kb

1

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ka

2

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kb

2

分别为组?/p>

a

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b

的比吸收系数,即组分

a

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b

)的浓度为(

1g/L

)时,其在相应波?/p>

?/p>

λ

1

?/p>

λ

2

?/p>

?/p>

的光密度

OD

值?/p>

 

叶绿?/p>

A

?/p>

B

?/p>

80%

丙酮溶液,当浓度?/p>

1

时,比吸收系?/p>

K

值如下表?/p>

 

波长

/nm 

叶绿?/p>

a 

叶绿?/p>

b 

663 

82.04 

9.27 

645 

16.75 

45.60 

将表中数值代入上式(

1

?/p>

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?/p>

2

)并整理的:

 

Ca=0.0127OD

663

-0.00269OD

645

 

Cb=0.0229OD

645

-0.00468OD

663

 

若把

Ca

?/p>

Cb

的浓度单位从原来?/p>

g/L

改为

mg/L

,则上式可改写为下列形式?/p>

 

Ca=12.7OD

663

-2.69OD

645 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(3) 

Cb=22.9OD

645

-4.68OD

663 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(4) 

Ct=Ca+Cb=8.02OD

663

+20.21OD

645 

 

 

 

(5) 

Ct

为叶绿素总浓度,单位?/p>

g/L

?/p>

 

利用?/p>

3

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4

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5

)式即可计算出叶绿素

A

?/p>

B

及总叶绿素的浓度(

g/L

?/p>

?/p>

 

[器材与试剂?/p>

 

1.

 

实验仪器:高级型分光光度计,离心机,台天平,剪刀,研钵,漏斗,移液管

 

2.

 

实验试剂:丙酮,碳酸?/p>

 

3.

 

实验材料:植物叶?/p>

 

[实验步骤]

 

1.

色素的提取:

取新鲜叶片,

剪去粗大的叶脉并剪成碎块?/p>

称取

0.5G

放入研钵中加纯丙?/p>

5ML

?/p>

少许碳酸钙和石英砂,

研磨成匀浆,再加

80%

丙酮

5ML

,将匀浆转入离心管,并用适量

80%

丙酮洗涤研钵,一并转入离心管,离心后弃沉淀,上?/p>

液用

80%

丙酮定容?/p>

20ML

?/p>

 

2.

测定光密度:取上述色素提取液

1ml

,加

80%

丙酮

4ml

稀释和转入比色杯中,以

80%

丙酮为对照,分别测定

663nm

?/p>

645nm

处的光密度值?/p>

 

3.

按公式分别计算色素提取液中叶绿素

A

?/p>

B

及叶绿素总浓度。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素的含量?/p>

 

[注意事项]

 

1.

 

由于植物子叶中含有水分,故先用纯丙酮进行提取,以色素提取液中丙酮的最终浓度近?/p>

80%

?/p>

 

2.

 

由于叶绿?/p>

A

?/p>

B

的吸收峰很陡,仪器波长稍有偏差,就会使结果产生很大的误差,因此最好能用波长较正确的高

级型分光光度计?/p>

 

[实验作业]

 

1.

 

试比较阴生植物和阳生植物的叶绿素

A

和叶绿素

B

的比值有无不同?/p>

 

2.

 

分光光度法和比色法有何不同?

 

3.

 

叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

在红光区和蓝光区都有最大吸收峰?/p>

能否用蓝光区的最大吸收峰波长进行叶绿?/p>

A

和叶绿素

B

的定量分析,为什么?

 



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