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实验?/p>

 

碱性蛋白酶活力的测?/p>

 

一、实验原?/p>

 

以酪蛋白为底物测定碱性蛋白酶的活力?/p>

酪蛋白经蛋白酶作用后?/p>

会降解成

相对分子质量较小的肽和氨基酸?/p>

在反应混合物中加入三氯醋酸溶液,

相对分子

质量较大的蛋白质和肽就沉淀下来?/p>

相对分子质量较小的肽和氨基酸仍留在溶?/p>

中。溶解于三氯醋酸溶液中的肽的数量正比于酶的数量和反应时间。因而采?/p>

Folin

法测定上清液中肽的含量就可以计算酶的活力?/p>

 

二、试剂和仪器

 

试剂?/p>

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)?/p>

5%

三氯醋酸?/p>

1%

酪蛋白溶

液(称取

5g

酪蛋白置?/p>

500mL 

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)中?/p>

加热使其溶解)?/p>

0.4mol/L

碳酸钠溶液?/p>

100μg/mL

酪氨酸溶液?/p>

Folin

试剂,稀

?/p>

3

倍使?/p>

 

仪器:水浴锅?/p>

721

分光光度计(含比色皿)、秒表、常规玻璃仪?/p>

 

三、实验步?/p>

 

1

、酶液的萃取

 

称取

1g

粗酶制剂置于研钵中,

加少量缓冲液一起研磨,

然后定容?/p>

100mL

?/p>

从容量瓶中取?/p>

5mL

酶液(视酶活而定)再定容?/p>

100mL

,稀释后的酶液经?/p>

纸过滤后得到澄清的酶液?/p>

 

2

、酶活力的测?/p>

 

样品管:

取不同量的酶?/p>

?/p>

0.1~1.0mL

?/p>

0.2mL

?/p>

0.4mL

?/p>

0.6mL

?/p>

?/p>

?/p>

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)(对应?/p>

0.8mL

?/p>

0.6mL

?/p>

0.4mL

)补足体积到

1.0mL

?/p>

然后在每个样品管中再加入

1mL

预先?/p>

40

℃保温的

1%

酪蛋白溶液,

?/p>

匀,在

40

℃准确保?/p>

10min

,加?/p>

2mL 5%

三氯醋酸溶液,迅速摇匀,于室温?/p>

置半小时?/p>

 

空白管:

先在每支试管中各加入

1.0mL 1%

酪蛋白溶液和

2.0mL 5%

三氯醋酸

溶液,摇匀后,再加?/p>

1.0mL

的酶液,酶液浓度分别与对应的样品管相同,?/p>

40

℃下准确保温

10min

,以下操作同样品管?/p>

 

将酶反应混合物过滤后收集滤液,在

1mL

滤液中加

5mL 0.4mol/L

碳酸钠溶

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实验?/p>

 

碱性蛋白酶活力的测?/p>

 

一、实验原?/p>

 

以酪蛋白为底物测定碱性蛋白酶的活力?/p>

酪蛋白经蛋白酶作用后?/p>

会降解成

相对分子质量较小的肽和氨基酸?/p>

在反应混合物中加入三氯醋酸溶液,

相对分子

质量较大的蛋白质和肽就沉淀下来?/p>

相对分子质量较小的肽和氨基酸仍留在溶?/p>

中。溶解于三氯醋酸溶液中的肽的数量正比于酶的数量和反应时间。因而采?/p>

Folin

法测定上清液中肽的含量就可以计算酶的活力?/p>

 

二、试剂和仪器

 

试剂?/p>

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)?/p>

5%

三氯醋酸?/p>

1%

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液(称取

5g

酪蛋白置?/p>

500mL 

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

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加热使其溶解)?/p>

0.4mol/L

碳酸钠溶液?/p>

100μg/mL

酪氨酸溶液?/p>

Folin

试剂,稀

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3

倍使?/p>

 

仪器:水浴锅?/p>

721

分光光度计(含比色皿)、秒表、常规玻璃仪?/p>

 

三、实验步?/p>

 

1

、酶液的萃取

 

称取

1g

粗酶制剂置于研钵中,

加少量缓冲液一起研磨,

然后定容?/p>

100mL

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从容量瓶中取?/p>

5mL

酶液(视酶活而定)再定容?/p>

100mL

,稀释后的酶液经?/p>

纸过滤后得到澄清的酶液?/p>

 

2

、酶活力的测?/p>

 

样品管:

取不同量的酶?/p>

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0.1~1.0mL

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0.2mL

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0.4mL

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0.6mL

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0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)(对应?/p>

0.8mL

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0.6mL

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0.4mL

)补足体积到

1.0mL

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然后在每个样品管中再加入

1mL

预先?/p>

40

℃保温的

1%

酪蛋白溶液,

?/p>

匀,在

40

℃准确保?/p>

10min

,加?/p>

2mL 5%

三氯醋酸溶液,迅速摇匀,于室温?/p>

置半小时?/p>

 

空白管:

先在每支试管中各加入

1.0mL 1%

酪蛋白溶液和

2.0mL 5%

三氯醋酸

溶液,摇匀后,再加?/p>

1.0mL

的酶液,酶液浓度分别与对应的样品管相同,?/p>

40

℃下准确保温

10min

,以下操作同样品管?/p>

 

将酶反应混合物过滤后收集滤液,在

1mL

滤液中加

5mL 0.4mol/L

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碱性蛋白酶活力的测?/p>

 

一、实验原?/p>

 

以酪蛋白为底物测定碱性蛋白酶的活力?/p>

酪蛋白经蛋白酶作用后?/p>

会降解成

相对分子质量较小的肽和氨基酸?/p>

在反应混合物中加入三氯醋酸溶液,

相对分子

质量较大的蛋白质和肽就沉淀下来?/p>

相对分子质量较小的肽和氨基酸仍留在溶?/p>

中。溶解于三氯醋酸溶液中的肽的数量正比于酶的数量和反应时间。因而采?/p>

Folin

法测定上清液中肽的含量就可以计算酶的活力?/p>

 

二、试剂和仪器

 

试剂?/p>

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)?/p>

5%

三氯醋酸?/p>

1%

酪蛋白溶

液(称取

5g

酪蛋白置?/p>

500mL 

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)中?/p>

加热使其溶解)?/p>

0.4mol/L

碳酸钠溶液?/p>

100μg/mL

酪氨酸溶液?/p>

Folin

试剂,稀

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3

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仪器:水浴锅?/p>

721

分光光度计(含比色皿)、秒表、常规玻璃仪?/p>

 

三、实验步?/p>

 

1

、酶液的萃取

 

称取

1g

粗酶制剂置于研钵中,

加少量缓冲液一起研磨,

然后定容?/p>

100mL

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从容量瓶中取?/p>

5mL

酶液(视酶活而定)再定容?/p>

100mL

,稀释后的酶液经?/p>

纸过滤后得到澄清的酶液?/p>

 

2

、酶活力的测?/p>

 

样品管:

取不同量的酶?/p>

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0.1~1.0mL

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-

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1.0mL

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然后在每个样品管中再加入

1mL

预先?/p>

40

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1%

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40

℃准确保?/p>

10min

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2mL 5%

三氯醋酸溶液,迅速摇匀,于室温?/p>

置半小时?/p>

 

空白管:

先在每支试管中各加入

1.0mL 1%

酪蛋白溶液和

2.0mL 5%

三氯醋酸

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1.0mL

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40

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10min

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1mL

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5mL 0.4mol/L

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碱性蛋白酶活力的测?- 百度文库
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碱性蛋白酶活力的测?/p>

 

一、实验原?/p>

 

以酪蛋白为底物测定碱性蛋白酶的活力?/p>

酪蛋白经蛋白酶作用后?/p>

会降解成

相对分子质量较小的肽和氨基酸?/p>

在反应混合物中加入三氯醋酸溶液,

相对分子

质量较大的蛋白质和肽就沉淀下来?/p>

相对分子质量较小的肽和氨基酸仍留在溶?/p>

中。溶解于三氯醋酸溶液中的肽的数量正比于酶的数量和反应时间。因而采?/p>

Folin

法测定上清液中肽的含量就可以计算酶的活力?/p>

 

二、试剂和仪器

 

试剂?/p>

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)?/p>

5%

三氯醋酸?/p>

1%

酪蛋白溶

液(称取

5g

酪蛋白置?/p>

500mL 

0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

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加热使其溶解)?/p>

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碳酸钠溶液?/p>

100μg/mL

酪氨酸溶液?/p>

Folin

试剂,稀

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3

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仪器:水浴锅?/p>

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分光光度计(含比色皿)、秒表、常规玻璃仪?/p>

 

三、实验步?/p>

 

1

、酶液的萃取

 

称取

1g

粗酶制剂置于研钵中,

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然后定容?/p>

100mL

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从容量瓶中取?/p>

5mL

酶液(视酶活而定)再定容?/p>

100mL

,稀释后的酶液经?/p>

纸过滤后得到澄清的酶液?/p>

 

2

、酶活力的测?/p>

 

样品管:

取不同量的酶?/p>

?/p>

0.1~1.0mL

?/p>

0.2mL

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0.4mL

?/p>

0.6mL

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0.1mol/L

碳酸?/p>

-

碳酸氢钠缓冲液(

pH10

)(对应?/p>

0.8mL

?/p>

0.6mL

?/p>

0.4mL

)补足体积到

1.0mL

?/p>

然后在每个样品管中再加入

1mL

预先?/p>

40

℃保温的

1%

酪蛋白溶液,

?/p>

匀,在

40

℃准确保?/p>

10min

,加?/p>

2mL 5%

三氯醋酸溶液,迅速摇匀,于室温?/p>

置半小时?/p>

 

空白管:

先在每支试管中各加入

1.0mL 1%

酪蛋白溶液和

2.0mL 5%

三氯醋酸

溶液,摇匀后,再加?/p>

1.0mL

的酶液,酶液浓度分别与对应的样品管相同,?/p>

40

℃下准确保温

10min

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