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异硫氰酸?/p>

 

强用力的蛋白质变性剂?/p>

能迅速溶解蛋白质?/p>

导致细胞结构破碎?/p>

核蛋白由于其二级?/p>

构的破坏消失而迅速与核酸分离?/p>

胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂?/p>

在通常使用的蛋?/p>

质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍?/p>

它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态?/p>

?/p>

有强力的阴离子和阳离子基团,

它们可以形成较强的氢键?/p>

在还原剂存在的情况下?/p>

异硫?/p>

酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如

SDS

存在的情况下,可以破坏疏水作用?/p>

 

 

盐酸胍、尿?/p>

 

盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂,它并不是一种足够强的变性剂,可以允许完整的

RNA

从富?/p>

RNase

的组织中提取出来?/p>

 

4-8M

可断裂氢键,有两种可能机制:

1

变性蛋白和盐酸胍?/p>

尿素优先结合,形成变性蛋

?/p>

-

变性剂复合物,当复合物被除去,从而引?/p>

N-D

反应平衡向右移动,随着变性剂浓度?/p>

加,天然状态的蛋白不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;

2

盐酸胍、尿素对氨基

酸的增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水的氢键结构,结果盐酸胍、尿素就称为

非极性残基的较好溶剂?/p>

使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强,

盐酸胍?/p>

尿素引起?/p>

变性往往是不可逆的?/p>

 

高浓度尿素使蛋白质变性并抑制

Rnase

活?/p>

 

 

十二烷基肌氨酸钠

  

使蛋白质解体

 

变?/p>

 

 

巯基试剂

 

1

防止蛋白质或酶等(如辅酶

A

)分子中

SH

基团氧化成二硫键?/p>

2

在某些酶反应过程?/p>

维持体系的还原环境?/p>

DTT

?/p>

DDTE

、巯基乙醇应用最广,谷胱甘肽也常应用,由于他是生?/p>

体内的还原剂,同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放?/p>

DNA

提取中,常使用巯基乙醇,

维持缓冲液的还原环境,防止多酚类氧化,由于具有一定的毒性,浓度不应高于

2%

?/p>

 

 

巯基乙醇

 

β

-

巯基乙醇的主要作用是破坏

RNase

蛋白质中的二硫键(肽和蛋白质分子中的

半胱氨酸

?/p>

基中的键)?/p>

 

1 

还原蛋白质二硫键,使

Rna

酶变?/p>

 

2 

抑制酚类氧化?/p>

若氧化,

核酸会变成灰黑色?/p>

苯酚的氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二?/p>

键的断裂及导?/p>

RNA

?/p>

DNA

的交?/p>

 

3 

保护蛋白质的巯基

 

 

 

蛋白质提取中需?/p>

 

 

巯基乙醇还原二硫键,?/p>

RNA

酶失?/p>

 

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异硫氰酸?/p>

 

强用力的蛋白质变性剂?/p>

能迅速溶解蛋白质?/p>

导致细胞结构破碎?/p>

核蛋白由于其二级?/p>

构的破坏消失而迅速与核酸分离?/p>

胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂?/p>

在通常使用的蛋?/p>

质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍?/p>

它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态?/p>

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有强力的阴离子和阳离子基团,

它们可以形成较强的氢键?/p>

在还原剂存在的情况下?/p>

异硫?/p>

酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如

SDS

存在的情况下,可以破坏疏水作用?/p>

 

 

盐酸胍、尿?/p>

 

盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂,它并不是一种足够强的变性剂,可以允许完整的

RNA

从富?/p>

RNase

的组织中提取出来?/p>

 

4-8M

可断裂氢键,有两种可能机制:

1

变性蛋白和盐酸胍?/p>

尿素优先结合,形成变性蛋

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-

变性剂复合物,当复合物被除去,从而引?/p>

N-D

反应平衡向右移动,随着变性剂浓度?/p>

加,天然状态的蛋白不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;

2

盐酸胍、尿素对氨基

酸的增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水的氢键结构,结果盐酸胍、尿素就称为

非极性残基的较好溶剂?/p>

使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强,

盐酸胍?/p>

尿素引起?/p>

变性往往是不可逆的?/p>

 

高浓度尿素使蛋白质变性并抑制

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活?/p>

 

 

十二烷基肌氨酸钠

  

使蛋白质解体

 

变?/p>

 

 

巯基试剂

 

1

防止蛋白质或酶等(如辅酶

A

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基团氧化成二硫键?/p>

2

在某些酶反应过程?/p>

维持体系的还原环境?/p>

DTT

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DDTE

、巯基乙醇应用最广,谷胱甘肽也常应用,由于他是生?/p>

体内的还原剂,同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放?/p>

DNA

提取中,常使用巯基乙醇,

维持缓冲液的还原环境,防止多酚类氧化,由于具有一定的毒性,浓度不应高于

2%

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巯基乙醇

 

β

-

巯基乙醇的主要作用是破坏

RNase

蛋白质中的二硫键(肽和蛋白质分子中的

半胱氨酸

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基中的键)?/p>

 

1 

还原蛋白质二硫键,使

Rna

酶变?/p>

 

2 

抑制酚类氧化?/p>

若氧化,

核酸会变成灰黑色?/p>

苯酚的氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二?/p>

键的断裂及导?/p>

RNA

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保护蛋白质的巯基

 

 

 

蛋白质提取中需?/p>

 

 

巯基乙醇还原二硫键,?/p>

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强用力的蛋白质变性剂?/p>

能迅速溶解蛋白质?/p>

导致细胞结构破碎?/p>

核蛋白由于其二级?/p>

构的破坏消失而迅速与核酸分离?/p>

胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂?/p>

在通常使用的蛋?/p>

质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍?/p>

它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态?/p>

?/p>

有强力的阴离子和阳离子基团,

它们可以形成较强的氢键?/p>

在还原剂存在的情况下?/p>

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酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如

SDS

存在的情况下,可以破坏疏水作用?/p>

 

 

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盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂,它并不是一种足够强的变性剂,可以允许完整的

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可断裂氢键,有两种可能机制:

1

变性蛋白和盐酸胍?/p>

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N-D

反应平衡向右移动,随着变性剂浓度?/p>

加,天然状态的蛋白不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;

2

盐酸胍、尿素对氨基

酸的增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水的氢键结构,结果盐酸胍、尿素就称为

非极性残基的较好溶剂?/p>

使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强,

盐酸胍?/p>

尿素引起?/p>

变性往往是不可逆的?/p>

 

高浓度尿素使蛋白质变性并抑制

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十二烷基肌氨酸钠

  

使蛋白质解体

 

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巯基试剂

 

1

防止蛋白质或酶等(如辅酶

A

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基团氧化成二硫键?/p>

2

在某些酶反应过程?/p>

维持体系的还原环境?/p>

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、巯基乙醇应用最广,谷胱甘肽也常应用,由于他是生?/p>

体内的还原剂,同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放?/p>

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提取中,常使用巯基乙醇,

维持缓冲液的还原环境,防止多酚类氧化,由于具有一定的毒性,浓度不应高于

2%

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巯基乙醇的主要作用是破坏

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蛋白质中的二硫键(肽和蛋白质分子中的

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核酸提取常见试剂的作用原?- 百度文库
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强用力的蛋白质变性剂?/p>

能迅速溶解蛋白质?/p>

导致细胞结构破碎?/p>

核蛋白由于其二级?/p>

构的破坏消失而迅速与核酸分离?/p>

胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂?/p>

在通常使用的蛋?/p>

质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍?/p>

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有强力的阴离子和阳离子基团,

它们可以形成较强的氢键?/p>

在还原剂存在的情况下?/p>

异硫?/p>

酸胍可以断裂氢键,而去垢剂,如

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存在的情况下,可以破坏疏水作用?/p>

 

 

盐酸胍、尿?/p>

 

盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂,它并不是一种足够强的变性剂,可以允许完整的

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可断裂氢键,有两种可能机制:

1

变性蛋白和盐酸胍?/p>

尿素优先结合,形成变性蛋

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变性剂复合物,当复合物被除去,从而引?/p>

N-D

反应平衡向右移动,随着变性剂浓度?/p>

加,天然状态的蛋白不断转变为复合物,最终导致蛋白质完全变性;

2

盐酸胍、尿素对氨基

酸的增溶作用,能形成氢键,当浓度高时,能破坏水的氢键结构,结果盐酸胍、尿素就称为

非极性残基的较好溶剂?/p>

使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强,

盐酸胍?/p>

尿素引起?/p>

变性往往是不可逆的?/p>

 

高浓度尿素使蛋白质变性并抑制

Rnase

活?/p>

 

 

十二烷基肌氨酸钠

  

使蛋白质解体

 

变?/p>

 

 

巯基试剂

 

1

防止蛋白质或酶等(如辅酶

A

)分子中

SH

基团氧化成二硫键?/p>

2

在某些酶反应过程?/p>

维持体系的还原环境?/p>

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、巯基乙醇应用最广,谷胱甘肽也常应用,由于他是生?/p>

体内的还原剂,同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放?/p>

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提取中,常使用巯基乙醇,

维持缓冲液的还原环境,防止多酚类氧化,由于具有一定的毒性,浓度不应高于

2%

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巯基乙醇

 

β

-

巯基乙醇的主要作用是破坏

RNase

蛋白质中的二硫键(肽和蛋白质分子中的

半胱氨酸

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基中的键)?/p>

 

1 

还原蛋白质二硫键,使

Rna

酶变?/p>

 

2 

抑制酚类氧化?/p>

若氧化,

核酸会变成灰黑色?/p>

苯酚的氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二?/p>

键的断裂及导?/p>

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3 

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